重組人促紅細(xì)胞生成素(rhEPO)對(duì)帕金森病大鼠模型小膠質(zhì)細(xì)胞活化及炎癥因子表達(dá)的影響.pdf

1、帕金森病(Parkinson's disease，PD)是以運(yùn)動(dòng)障礙為主要臨床特征的進(jìn)展性神經(jīng)系統(tǒng)變性病，其病理改變以黑質(zhì)多巴胺(dopamine，DA)能神經(jīng)元變性丟失為主。目前主要的治療方法為DA替代治療。雖然DA替代治療能夠改善癥狀，但長(zhǎng)期應(yīng)用則會(huì)出現(xiàn)很多并發(fā)癥和副作用，而且這些并發(fā)癥以目前的治療措施很難控制。并且在眾多抗PD藥物中沒(méi)有任何一種能夠阻止或逆轉(zhuǎn)疾病的進(jìn)展，因此神經(jīng)保護(hù)治療開(kāi)始成為人們研究的熱點(diǎn)。其中，促紅細(xì)胞生成素(

2、eryhropoietin，EPO)作為造血因子，一般在胎兒肝臟和成人腎臟中產(chǎn)生，并在組織缺氧情況下刺激骨髓紅細(xì)胞造血。EPO一直被用于治療慢性腎衰或癌癥化療引起的貧血。最近，研究發(fā)現(xiàn)EPO在很多中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾病中發(fā)揮著神經(jīng)保護(hù)作用，如EPO可以減輕腦外傷、腦缺血、癲癇持續(xù)狀態(tài)等誘發(fā)的神經(jīng)細(xì)胞損傷，而且在Alzheimer病、肌萎縮側(cè)索硬化、Huntington病、Parkinson's病等神經(jīng)變性病中也具有保護(hù)作用。隨著年齡

3、的增長(zhǎng)，EPO在CNS的含量逐漸減少，提示EPO可能和衰老有關(guān)的神經(jīng)變性病有關(guān)。實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)EPO對(duì)多種神經(jīng)元均有保護(hù)作用，其中包括黑質(zhì)DA能神經(jīng)元，但是作用機(jī)制還不十分清楚。以往人們認(rèn)為，EPO主要是通過(guò)抗氧化應(yīng)激、抑制凋亡、抑制谷氨酸鹽釋放來(lái)保護(hù)DA能神經(jīng)元。最近有人提出EPO的保護(hù)作用是通過(guò)抑制炎癥因子產(chǎn)生，發(fā)揮抗炎作用實(shí)現(xiàn)的，但這一結(jié)論引起了爭(zhēng)議。
　　 本實(shí)驗(yàn)在6-OHDA誘導(dǎo)的PD大鼠模型中，觀察rhEPO對(duì)小膠質(zhì)細(xì)

4、胞及膠質(zhì)細(xì)胞源性炎癥因子表達(dá)的影響，探討rhEPO是否通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
　　 目的：探討重組人促紅細(xì)胞生成素(recombinant human erythropoietin，rhEPO)對(duì)6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘導(dǎo)的SD大鼠帕金森病(PD)模型小膠質(zhì)細(xì)胞活化及膠質(zhì)細(xì)胞源性炎癥因子表達(dá)的影響。
　　 方法：SD大鼠隨機(jī)分為四組：A組(rhEPO+6-OHDA)、B組(生理鹽水+6-OHDA)、C

5、組(6-OHDA)、D組(生理鹽水)。(1)A組：右側(cè)紋狀體內(nèi)立體定向注射rhEPO24小時(shí)后同側(cè)黑質(zhì)內(nèi)立體定向注射6-OHDA；(2)B組：右側(cè)紋狀體內(nèi)立體定向注射與rhEPO等量的生理鹽水24小時(shí)后同側(cè)黑質(zhì)內(nèi)立體定向注射6-OHDA；(3)C組：右側(cè)黑質(zhì)內(nèi)立體定向注射6-OHDA；(4)D組：右側(cè)黑質(zhì)內(nèi)立體定向注射與6-OHDA等量的生理鹽水。4周后從A、B、C組各選取10只成功PD大鼠，從D組隨機(jī)選取10只大鼠進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)：免疫組

6、化法檢測(cè)黑質(zhì)內(nèi)酪氨酸羥化酶(TH)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量和CD11b陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量的變化；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量的變化；反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測(cè)黑質(zhì)內(nèi)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：與D組比較，A組大鼠黑質(zhì)TH陽(yáng)性神經(jīng)元顯著減少(P<0.05)，CD11b陽(yáng)性細(xì)胞顯著增多(P<0.

7、05)，血清iNOS、TNF-α含量顯著增多(P<0.05)，黑質(zhì)iNOS、TNF-αmRNA表達(dá)顯著增高(P<0.05)；與B組和C組比較，A組大鼠黑質(zhì)TH陽(yáng)性神經(jīng)元明顯增多(P<0.05)，CD11b陽(yáng)性細(xì)胞明顯減少(P<0.05)，血清iNOS、TNF-α含量明顯減少(P<0.05)，黑質(zhì)iNOS、TNF-αmRNA表達(dá)明顯降低(P<0.05)。
　　 結(jié)論：rhEPO可能通過(guò)抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化，減少TNF-α、iNOS炎