一株雞傳染性貧血病毒野毒株致病性及其全基因組序列比較.pdf

1、雞傳染性貧血病毒(Chicken anemia virus，CAV)可以破壞造血系統(tǒng)，并可使淋巴器官萎縮，導(dǎo)致雞群免疫抑制，CAV的免疫抑制又經(jīng)常使感染雞群并發(fā)或繼發(fā)其它病原體的多重感染。 本文通過(guò)對(duì)1日齡SPF雞的攻毒實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的研究了CAV野毒株CAV-C14對(duì)SPF雞的致病性。攻毒28天和42天后，CAV-C14能夠引起SPF雞體重下降、免疫器官(胸腺、法氏囊)萎縮以及大、小腿骨骨髓顏色變淡變黃等臨床癥狀，在攻毒后12天和1

2、4天后均可引起循環(huán)血中紅細(xì)胞數(shù)一定程度的下降，攻毒14天后紅細(xì)胞數(shù)比對(duì)照組顯著下降(P<0.05)。但在10<'4>TCID<,50>/只的攻毒劑量下沒(méi)有引起SPF雞的死亡。 用1日齡SPF雞人工感染C14株CAV和禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病病毒(REV)，研究了CAV單獨(dú)以及與REV共感染時(shí)對(duì)雞體疫苗免疫反應(yīng)的影響。在攻毒后21天，CAV單獨(dú)感染組(5.81±1.38)與REV單獨(dú)感染組(4.56±2.57)的AIV-H9 HI抗體滴度

3、(10g2)比對(duì)照組(7.43±1.16)顯著降低，共感染組(2.8±2.57)的抗體滴度下降更為顯著；在攻毒后35天，CAV單獨(dú)感染組(7.55±1.63)與REV單獨(dú)感染組(7.31±2.78)AIV-H5 HI抗體滴度(10g2)比對(duì)照組(9.42±1.57)顯著降低，共感染組(4.86±3.08)抗體滴度下降的更為顯著。結(jié)果表明，在用禽流感病毒(AIV，H5和H9)疫苗免疫后，CAV單獨(dú)感染組與REV單獨(dú)感染均能顯著抑制雞體對(duì)H

4、5和H9亞型禽流感病毒滅活疫苗的HI抗體反應(yīng)，在CAV與REV共感染后，這種抑制作用更為明顯。在攻毒21天和35天后，C14株CAV單獨(dú)感染能夠抑制雞體對(duì)新城疫病毒(NDV)和傳染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗的免疫反應(yīng)，但與對(duì)照組在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異不顯著。然而，C14株CAV可以顯著加重(P<0.05)REV感染對(duì)雞體在免疫NDV和IBDV疫苗后抗體反應(yīng)的抑制作用。本研究證實(shí)了CAV與REV共感染時(shí)對(duì)SPF雞在免疫抑制上存在協(xié)同作用。

5、 用PCR方法分段擴(kuò)增出CAV-C14基因組的三條部分重疊片段，分別克隆于T載體并進(jìn)行測(cè)序，拼接后得到其全基因組序列。測(cè)序結(jié)果表明，CAV-C14株基因組全長(zhǎng)2298bp，含有三個(gè)互相重疊的開(kāi)放閱讀框和一個(gè)調(diào)控區(qū)。將C14與國(guó)內(nèi)外己發(fā)表的CAV參考株基因組比較，同源性為97.2％-99.2％。序列比較還表明，CAV非編碼區(qū)中含有的多個(gè)與復(fù)制及轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)的基序序列都非常保守。CAV的三個(gè)編碼基因VP1、VP2和VP3均有一定程度變

6、異，以VP1變異性最大，且不同毒株間的三個(gè)蛋白質(zhì)氨基酸序列的變異是互不相關(guān)的。根據(jù)已發(fā)表的雞傳染性貧血病毒(CAV)的基因序列設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，以山東分離野毒株CAV-C14為模板，擴(kuò)增了VP1基因內(nèi)部的一大段序列。將PCR產(chǎn)物按正確的閱讀框架克隆到表達(dá)性載體pGEX-6P-1谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)基因的下游。將篩選到的相應(yīng)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的大腸桿菌BL21株，在1.0mM IPTG濃度和37℃條件下誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE電泳后將表達(dá)