馬傳染性貧血病毒部分致弱毒株體外和體內(nèi)的進(jìn)化分析.pdf

1、我國研制成功的馬傳染性貧血病毒驢白細(xì)胞弱毒疫苗株DLV是將一株來源于馬體的EIAV強(qiáng)毒LV(遼毒株)經(jīng)過驢體連續(xù)傳代100余代使其病毒毒力增強(qiáng)后獲得了驢強(qiáng)毒株DV(對(duì)馬和驢致死率為90％)，然后將該驢強(qiáng)毒株通過驢白細(xì)胞體外連續(xù)培養(yǎng)馴化120余代，使該毒株病毒毒力喪失的同時(shí)又保持了良好的免疫原性，最終培育成功了EIAV驢白細(xì)胞弱毒疫苗。將驢白細(xì)胞弱毒疫苗株進(jìn)一步通過驢胎皮膚細(xì)胞繼代，又獲得比驢白細(xì)胞弱毒疫苗免疫保護(hù)效果更好的驢胎皮膚細(xì)胞弱

2、毒疫苗FDDV。 為探討驢胎皮膚細(xì)胞弱毒疫苗株FDDV在免疫成熟馬體內(nèi)的進(jìn)化規(guī)律，本研究采用nestPCR方法對(duì)FDDV免疫成熟馬(FDDV免疫24個(gè)月后)體內(nèi)的低拷貝的FDDV前病毒基因組DNA進(jìn)行了分段(5段)擴(kuò)增和序列分析，旨在找出FDDV長期在免疫馬體內(nèi)的進(jìn)化規(guī)律并推導(dǎo)出其在體內(nèi)的優(yōu)勢序列，通過與體外FDDV基因組進(jìn)行比較分析，找到驢胎皮膚細(xì)胞弱毒疫苗株FDDV體內(nèi)體外演化過程中保守及變化區(qū)域。最終每段得到5個(gè)陽性克隆的

3、序列。通過比較分析發(fā)現(xiàn)：免疫馬體內(nèi)LTR與FDDV3—8LTR的同源率平均為98.8％，env編碼的氨基酸序列的同源率平均為96.1％。免疫馬體內(nèi)外FDDV的囊膜蛋白gp90變異較大，與體外gp90相比免疫馬體內(nèi)gp90的N—糖基化位點(diǎn)有增加現(xiàn)象。 為闡明EIAV疫苗的致弱機(jī)制和免疫保護(hù)機(jī)理，本研究采用LA-PCR技術(shù)對(duì)驢白細(xì)胞弱毒疫苗株減毒過程中第92代次毒株(DLV92)前病毒基因組DNA進(jìn)行了擴(kuò)增和序列分析，旨找出潛在的與

4、毒力變化和免疫保護(hù)相關(guān)的穩(wěn)定變異位點(diǎn)和相關(guān)特性。本實(shí)驗(yàn)成功的得到了8株接近DLV92全長的8Kb的前病毒基因組核酸序列。通過比較分析得出：DLV92與DLV878(疫苗株DLV，GenBank中登陸號(hào)為AF327878)同源率平均為98.1％，與LV877(EIAV強(qiáng)毒遼寧株LV，GenBank中登陸號(hào)為AF327877)核苷酸序列的同源率平均為97.7％。DLV92囊膜蛋白gp90上存在17個(gè)N—糖基化位點(diǎn)，與疫苗株DLV878一致，