馬傳染性貧血病毒LTR嵌合克隆生物學特性的研究.pdf

1、本文為了揭示我國馬傳貧弱毒疫苗毒力致弱及免疫保護的分子機制，為人免疫缺陷病毒及其它慢病毒的免疫預防提供借鑒，利用我國擁有的馬傳染性貧血病毒疫苗培育系統(tǒng)(由強毒到弱毒的不同代次病毒)，對EIAV弱毒疫苗致弱過程中EIAV非編碼區(qū)LTR進行了序列分析，將病毒致弱的基因變異位點鎖定在有限范圍之內(nèi)。 本試驗基于代次毒分析結(jié)果，選取LTR變異率較高的U3區(qū)，以驢胎皮膚弱毒疫苗感染性分子克隆株pLGFD3-8和驢強毒株感染性分子克隆株為父本

2、操作系統(tǒng)進行基因替換，構(gòu)建EIAV非編碼區(qū)強弱毒嵌合的全基因分子克隆，將陽性重組質(zhì)粒命名為pLGFD9-12。將該嵌合克隆體外轉(zhuǎn)染驢胎皮膚細胞(FDD)并以驢白細胞(DL)傳代，通過逆轉(zhuǎn)錄酶活性試驗、前病毒DNAPCR擴增、RT-PCR方法及實時定量RT-PCR等試驗驗證其轉(zhuǎn)染結(jié)果。結(jié)果顯示，LTR嵌合克隆衍生病毒感染FDD和DL細胞均出現(xiàn)明顯的細胞病變，電鏡下可見大量典型的EIAV顆粒，將其病毒命名為vLGFD9-12；細胞培養(yǎng)上清可

3、檢測到RT酶活性；前病毒DNAPCR擴增和RT-PCR均為陽性。在細胞水平上對該嵌合克隆衍生毒及其親本感染性分子克隆毒株復制能力進行了檢測，發(fā)現(xiàn)此嵌合克隆衍生病毒與其父本克隆衍生病毒具有相似的復制水平，此嵌合克隆衍生病毒在DL細胞上復制水平略高于FDD細胞，保持了親本皮膚弱毒疫苗感染分子克隆的復制特點和細胞嗜性。同時也說明E-box基序和GATA基序的改變并沒有引起LTR對病毒復制和細胞嗜性的影響?！　”卷椦芯繛檫M一步確定我國馬傳貧弱