馬傳染性貧血病毒p9蛋白類(lèi)泛素化修飾位點(diǎn)的研究.pdf

1、馬傳染性貧血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)引起馬的持續(xù)性感染、病毒血癥及貧血,與人免疫缺陷病毒Ⅰ型(human immunodeficiency virus1,HIV-1)同屬反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬,二者有很多相似的特性。EIAV是基因組結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的慢病毒,而且安全性較高,成為研究慢病毒感染的重要模型。EIAV p9蛋白是位于Gag結(jié)構(gòu)蛋白末端的一個(gè)小蛋白,類(lèi)似于HIV-1的p6蛋白。近年來(lái)

2、的研究表明p9蛋白在EIAV病毒出芽和感染過(guò)程中起到重要的作用。
　　 類(lèi)泛素化修飾是一種重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式,調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能。小泛素相關(guān)修飾物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)是一種新發(fā)現(xiàn)的類(lèi)泛素樣分子,能可逆地共價(jià)修飾靶蛋白的賴(lài)氨酸殘基,修飾后不介導(dǎo)靶蛋白的蛋白酶體降解,而是參與靶蛋白的定位及功能調(diào)節(jié)過(guò)程。EIAV p9分子中有6個(gè)賴(lài)氨酸:分別為K5、K10、K30、

3、K31、K36和K38。本文將相應(yīng)位置的賴(lài)氨酸逐一突變?yōu)榫彼?并構(gòu)建了對(duì)應(yīng)的原核表達(dá)質(zhì)粒,在大腸桿菌SUMO化修飾系統(tǒng)中誘導(dǎo)表達(dá),利用Western Blot進(jìn)行檢測(cè),比較不同位置上賴(lài)氨酸突變后p9 SUMO化修飾的變化。結(jié)果表明EIAV p9蛋白可以被SUMO化修飾,修飾位點(diǎn)可能位于K30,可以用p9抗體、Gag抗體和標(biāo)簽抗體等多種抗體對(duì)修飾情況進(jìn)行檢測(cè)。本文的結(jié)果為深入研究p9的SUMO化修飾及這一修飾對(duì)EIAV等慢病毒復(fù)制和出芽