馬病毒抑制蛋白Viperin抑制馬傳染性貧血病毒復(fù)制的機(jī)制.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2 0 1 1 級博士學(xué)位論文馬病毒抑制蛋白V i p e r i n 抑制馬傳染性貧血病毒復(fù)制的機(jī)制M e c h a n i s m o f E q u i n e V i r u s I n h i b i t o r y P r o t e i n ( V i p e r i n )I n h i b i t i n gE I A V R e p l i c a t i o n課題來源：國家自然科學(xué)基金( 3 1 0

2、 7 0 8 0 9 ) ；國家“十二．五“ 科技重大專項(xiàng)( 2 0 1 l z x 0 9 3 0 7 —3 0 3 —0 3 ) 。學(xué)位申請人 湯艷東導(dǎo) 師 姓 名 黎誠耀教授周建華研究員專 業(yè) 名 稱培 養(yǎng) 類 型培 養(yǎng) 層 次所 在 學(xué) 院答辯委員會主席答辯委員會成員免疫學(xué)學(xué)術(shù)型博士生物技術(shù)學(xué)院江麗芳江振友付涌水張桂紅張雁2 0 1 4 年5 月2 1 日 廣州摘要在慢病毒中所起的作用。馬傳染性貧血病毒( E I A V ) 是

3、與H I V - 1 相似的病毒，是反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬中基因結(jié)構(gòu)最簡單的病毒。感染馬傳染性病毒的馬匹通常以反復(fù)發(fā)熱為特征，同時(shí)伴有病毒血癥，發(fā)熱，血小板減小癥和衰竭癥狀。E I A V 是巨噬細(xì)胞嗜性的病毒。感染的巨噬細(xì)胞是病毒的儲存庫，在整個馬傳染性貧血的發(fā)病過程中產(chǎn)生病毒準(zhǔn)種以及作為病毒的擴(kuò)散源。由于馬傳染性貧血病毒的研究比較廣泛，深入研究E I A V 與V i p e r i n 的相互作用，可為研究V i p e r i n

4、 在慢病毒中的作用機(jī)制提供更多的資料。為明確馬屬V i p e r i n 對馬傳染性貧血病毒的作用及其機(jī)理，本文克隆了馬的V i p e r i n 基因，并與人，恒河猴，小鼠以及豬的基因進(jìn)行了同源性比對。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，V i p e r i n 基因的N 端7 0 個氨基酸是高變區(qū)，包含了疏水的a 螺旋，但是其中的幾個亮氨酸位點(diǎn)卻高度保守，表明這些保守的亮氨酸位點(diǎn)對于疏水的G t 螺旋區(qū)域的功能可能具有重要作用。同時(shí)，S A M 區(qū)域的

5、S 1 基序( C x x x C x x C ) 含3個半胱氨酸，在已有報(bào)道的幾個物種中也是高度保守的。因此，為探明馬V i p e r i n與E I A V 相互作用的具體機(jī)制，以及與其他物種或病毒的區(qū)別，本文設(shè)計(jì)三個步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：首先，我們想明確E I A V 的感染是否會影響到V i p e r i n 基因的表達(dá)。本文采用定量P C R 的方法，發(fā)現(xiàn)E I A V 病毒感染之后，V i p e r i n 的表達(dá)在2 4

6、 小時(shí)以及9 6 小時(shí)出現(xiàn)兩個小高峰，在9 6 小時(shí)的時(shí)候，接毒組是對照組的2 ．8倍，因此E I A V 的感染可以上調(diào)V i p e r i n 的表達(dá)。其次，明確V i p e r i n 基因的表達(dá)是否會影響E I A V 的感染。由于馬的巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較低，本實(shí)驗(yàn)通過腺病毒載體將V i p e r i n 基因?qū)腭R巨噬細(xì)胞，然后接種病毒，檢測E I A V 病毒感染后4 8小時(shí)與7 2 小時(shí)的病毒產(chǎn)量。結(jié)果表明，在7 2

7、小時(shí)的時(shí)候，過表達(dá)V i p e r i n 的巨噬細(xì)胞的產(chǎn)毒量與對照組相比下降了將近一半( P < O ．0 5 ) 。同時(shí)，我們通過基因敲除( K n o c k d o w n ) 技術(shù)對巨噬細(xì)胞的V i p e r i n 基因進(jìn)行干擾。結(jié)果表明，與對照組相比，下調(diào)V i p e r i n 基因的表達(dá)，可以促進(jìn)E I A V 病毒的產(chǎn)量( P < O ．0 5 ) 。最后，明確V i p e r i n 抑制病毒復(fù)