Tat蛋白對(duì)馬傳染性貧血病毒長(zhǎng)末端重復(fù)序列啟動(dòng)子活性的影響.pdf

1、馬傳染性貧血病毒(equineinfectiousanemiavirus，EIAV)屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬，是馬傳染性貧血(equineinfectiousanemia，EIA，簡(jiǎn)稱馬傳貧)的病原體。我國(guó)的馬傳貧驢白細(xì)胞弱毒疫苗，是迄今為止世界上唯一投入應(yīng)用的慢病毒疫苗，應(yīng)用該疫苗成功地控制了我國(guó)馬傳貧的流行，同時(shí)該疫苗也是研究慢病毒免疫預(yù)防非常有價(jià)值的模型。反轉(zhuǎn)錄病毒前病毒基因組長(zhǎng)末端重復(fù)序列(LTR)對(duì)病毒復(fù)制有重要的調(diào)控作用，影

2、響到病毒的復(fù)制動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞嗜性、致病力等方面。 馬傳染性貧血病毒弱毒疫苗株在培育過(guò)程中LTR發(fā)生了兩處穩(wěn)定突變，分別是Tat反式激活區(qū)域(Tatactivatingregion，TAR)的起始?jí)A基G到A和poly(A)附加位點(diǎn)C到A的突變。本研究將EIAV強(qiáng)毒力毒株、白細(xì)胞弱毒(EIAV-DLA)、驢胎皮膚細(xì)胞弱毒(EIAV-FDD)的LTR，以及TAR起始?jí)A基、poly(A)附加位點(diǎn)突變的LTR分別克隆到pCAT3-basic

3、質(zhì)粒中，獲得位于報(bào)告基因氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)上游的不同LTR重組質(zhì)粒。同時(shí)將馬傳貧病毒反式激活蛋白Tat克隆于真核表達(dá)載體pCDNA3.1(+)，獲得了Tat蛋白的表達(dá)。將Tat表達(dá)質(zhì)粒分別與不同LTR克隆共轉(zhuǎn)染驢胎皮膚細(xì)胞，考察Tat對(duì)LTR啟動(dòng)子活性的增強(qiáng)作用。研究發(fā)現(xiàn)，在皮膚細(xì)胞中Tat蛋白可以特異性增強(qiáng)來(lái)源于皮膚細(xì)胞弱毒疫苗LTR的啟動(dòng)子活性，而對(duì)白細(xì)胞源性LTR無(wú)明顯增強(qiáng)作用。TAR起始位點(diǎn)和poly(A)的單堿基突變和