血管內(nèi)皮生長因子在急性肺損傷中動(dòng)態(tài)變化以及激素干預(yù)效果的研究.pdf

1、目的:探討血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在急性肺損傷中(Acute lung injury,ALI)的動(dòng)態(tài)變化和地塞米松的干預(yù)效果,為臨床合理應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療不同誘因引起的ALI/ARDS提供理論依據(jù)。
　　 方法:將112只清潔雄性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為14組,尾靜脈注射生理鹽水1ml對照組、尾靜脈注射脂多糖(LPS8mg/kg)2h、4h、6h模型組、

2、氣管內(nèi)滴入大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株懸液(E.coli3ml/kg)12h、24h、36h模型組,NS+Dex組及LPS2h+Dex組、4h+Dex組、6h+Dex組、E.coli12h+Dex組、24h+Dex組、36h+Dex干預(yù)組,每組8只。干預(yù)組在造模結(jié)束后立即腹腔內(nèi)注射地塞米松2mg/kg。造模結(jié)束后于各時(shí)間點(diǎn)10％水合氯醛腹腔注射麻醉(3ml/kg),固定在手術(shù)臺(tái)上。股動(dòng)脈放血,收集血液,離心(3000 rpm,4℃,10min),吸

3、取上清,分裝,-80℃保存,用于進(jìn)行VEGF測定,開胸處死動(dòng)物,暴露肺組織,止血鉗夾閉右主支氣管后,將右肺完整切除,取右肺上葉肺組織用于濕/干重比檢測,取右肺中葉肺組織用10％中性福爾馬林溶液固定,留做病理及免疫組織化學(xué)檢查。分離出氣管,經(jīng)氣管插管行左肺支氣管肺泡灌洗,取支氣管肺泡灌洗液(BALF),離心(1200 rpm,4℃,10min)，上清液分裝,-80℃保存,用于蛋白含量及VEGF的測定。細(xì)胞沉淀懸浮于200微升生理鹽水中,進(jìn)

4、行白細(xì)胞計(jì)數(shù),同時(shí)觀察地塞米松對上述指標(biāo)的影響。
　　 結(jié)果:(1)肺組織病理形態(tài)學(xué):光鏡下觀察脂多糖2小時(shí)后開始出現(xiàn)肺血管充血,炎癥細(xì)胞的浸潤,肺間質(zhì)水腫,4小時(shí)出現(xiàn)典型ALI的表現(xiàn):透明膜形成,6小時(shí)與4小時(shí)病理半定量評分比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;在氣管內(nèi)滴入大腸桿菌12小時(shí)后,發(fā)現(xiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤、氣道上皮細(xì)胞的脫落,肺泡水腫,24小時(shí)出現(xiàn)肺泡上皮細(xì)胞空泡化,壞死,細(xì)胞增殖,大量纖維蛋白的滲出,透明膜形成,部分肺實(shí)變。36小時(shí)較2

5、4小時(shí)病理半定量評分無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。給予激素干預(yù)后,LPS模型在2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)可見浸潤的炎癥細(xì)胞減少,蛋白滲出較少,病理半定量評分也相應(yīng)減少;E.coli模型在24小時(shí)、36小時(shí)出現(xiàn)肺泡水腫減輕,炎癥細(xì)胞浸潤及透明膜減少,病理半定量評分也相應(yīng)減少。
　　 (2)BALF中細(xì)胞總數(shù)、蛋白含量和肺組織W/D的變化:在LPS模型中BALF中細(xì)胞計(jì)數(shù)隨著時(shí)間的延長,肺泡灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增多,給予激素后肺泡灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯下

6、降;肺泡灌洗液中蛋白4小時(shí)達(dá)高峰,6小時(shí)開始下降,激素干預(yù)組同比相應(yīng)下降;濕干比,在LPS組2小時(shí)較對照組明顯升高,但隨著時(shí)間的推移,未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的進(jìn)一步增加,激素干預(yù)組同比相應(yīng)下降;在E.coli模型中肺泡灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù),肺泡灌洗液中蛋白,濕干比,隨著時(shí)間的延長,未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的增加,12小時(shí)、24小時(shí)與36小時(shí)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,給予激素后24小時(shí)、36小時(shí)均明顯下降。
　　 (3)血清和BALF中VEGF含量的變化:

7、血清中VEGF在LPS模型中2小時(shí)明顯高于對照組,6小時(shí)達(dá)高峰;在E.coli模型中12小時(shí)明顯高于對照組,隨著時(shí)間延長而增多,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,激素干預(yù)在兩模型組血清VEGF未呈現(xiàn)顯著差異,BALF中VEGF在LPS模型中2小時(shí)明顯高于對照組,隨著時(shí)間延長逐漸增加;在E.coli模型中12小時(shí)明顯高于對照組,隨著時(shí)間延長,逐漸增多;激素干預(yù)后兩模型BALF中VEGF均下降。
　　 (4)VEGF在肺組織表達(dá)的變化:VEGF陽性細(xì)

8、胞百分比在LPS模型中2小時(shí)明顯低于對照組,4小時(shí)出現(xiàn)升高,并高于對照組,6小時(shí)明顯高于4小時(shí),激素干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)均下降;在E.coli模型12小時(shí)明顯高于對照組,隨著時(shí)間延長表達(dá)增多,給予激素后下降;陽性目標(biāo)積分光密度值在LPS模型中2小時(shí)明顯低于對照組,隨著時(shí)間延長增多,但6小時(shí)才達(dá)對照水平,給予激素后明顯下降,在E.coli模型12小時(shí)明顯高于對照組,隨著時(shí)間延長表達(dá)增多,給予激素后下降。
　　 (5)直線相關(guān)分析顯示:E

9、.coli組VEGF陽性率與肺泡灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù)、陽性目標(biāo)積分光密度值呈顯著正相關(guān)與血清中VEGF呈負(fù)相關(guān);LPS組BALF中VEGF與肺泡灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù)、病理評分、BALF中VEGF陽性率、陽性目標(biāo)積分光密度值呈顯著正相關(guān)與血清中VEGF呈負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 1成功的復(fù)制了氣道內(nèi)注入大腸桿菌混懸液導(dǎo)致的內(nèi)源性急性肺損傷模型和尾靜脈注射LPS導(dǎo)致的外源性急性肺損傷模型。
　　 2 LPS誘導(dǎo)急性肺損傷