大鼠液壓沖擊傷性腦水腫水通道蛋白4的表達(dá)及其不同劑量甘露醇對其影響.pdf

1、第一部分大鼠液壓沖擊傷性腦水腫水通道蛋白4的表達(dá)
　　 目的:觀察大鼠液壓沖擊傷性腦水腫水通道蛋白4(AQP4)及其mRNA的表達(dá)規(guī)律;探討AQP4表達(dá)與液壓沖擊傷腦水腫的關(guān)系。
　　 方法:成年雄性SD大鼠64只,體重250-350g,隨機(jī)分為3組:正常對照組(NC組)8只,不行任何處理;假手術(shù)組(SO組)8只,常規(guī)麻醉開顱,但不行液壓沖擊;單純腦損傷組(BI組)48只,常規(guī)麻醉開顱,行液壓沖擊。
　　 NC組

2、和SO組于術(shù)后,BI組于術(shù)后第1h、6h、12h、24h、3d和7d各隨機(jī)選取8只,以10％水合氯醛麻醉,斷頭處死,開顱取腦,經(jīng)損傷區(qū)切成3mm厚冠狀腦片,置于4％多聚甲醛固定液中后固定24h,常規(guī)脫水、石蠟包埋,4μm切片,行HE染色和免疫組織化學(xué)染色方法檢測AQP4。從損傷區(qū)前緣取100mg左右腦組織應(yīng)用干濕重法測腦組織含水量。損傷區(qū)后緣腦組織矢狀分為2部分,分別用于免疫蛋白印跡(Western Blot)檢測AQP4蛋白和逆轉(zhuǎn)錄-

3、聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測AQP4mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1 大鼠腦含水量
　　 BI組與NC組相比,1h時差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),6h時稍升高(79.11±1.276),12h顯著升高(80.26±1.473,P＜0.05),24h至3d達(dá)到高峰(82.74±1.097,82.04±1.694,P＜0.05),7d時降低(80.72±1.866,P＜0.05)。
　　 2 免

4、疫組化
　　 AQP4主要在大腦皮質(zhì)深部、軟腦膜、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞膜及足突、神經(jīng)細(xì)胞膜、脈絡(luò)叢和室管膜等部位表達(dá)。BI組6h開始增高(471.40±45.19,P＜0.05),12h繼續(xù)升高(638.80±190.27,P＜0.05),24h達(dá)到高峰(944.20±101.84),顯著高于NC組(P＜0.05),7d后降低(538.00±118.88),仍高于NC組(P＜0.05)。
　　 3 Western Blot

5、>　　 BI組AQP4蛋白的表達(dá)6h開始增高(0.336±0.017),12h繼續(xù)升高(0.488±0.029,P＜0.05),24h達(dá)到高峰(0.762±0.013,P＜0.05),3d后開始降低(0.688±0.028),7d后明顯降低(0.525±0.016),但仍高于正常(P＜0.05)。
　　 4 RT-PCR
　　 BI組AQP4mRNA的表達(dá)6h開始增高(0.626±0.054),12h繼續(xù)升高(0.67

6、7±0.048,P＜0.05),24h至3d達(dá)到高峰(0.764±0.077,0.758±0.057,P＜0.05),7d后降低(0.723±0.056),仍高于NC組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1 大鼠液壓沖擊傷性腦水腫AQP4及其mRNA表達(dá)呈升高趨勢。
　　 2 大鼠液壓沖擊傷性腦水腫嚴(yán)重程度與AQP4及其mRNA表達(dá)呈正相關(guān)。
　　 3 液壓沖擊傷后及時、正確調(diào)控AQP4表達(dá)可能是治療

7、腦水腫的一種新思路。
　　 第二部分不同劑量甘露醇對大鼠液壓沖擊傷性腦水腫水通道蛋白4表達(dá)的影響
　　 目的:研究不同劑量甘露醇對大鼠液壓沖擊傷性AQP4及其mRNA表達(dá)的影響,探討不同劑量甘露醇緩解腦水腫的效果和機(jī)制,為篩選甘露醇最佳臨床應(yīng)用劑量提供理論依據(jù)。
　　 方法:成年雄性SD大鼠208只,體重250-350g,隨機(jī)分為6組:正常對照組(NC組)8只,不行任何處理;假手術(shù)組(SO組)8只,常規(guī)麻醉開顱,

8、但不行液壓沖擊;單純腦損傷組(BI組)48只,行液壓沖擊;甘露醇組按不同劑量(0.5g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg)分為3個亞組,即甘露醇1組(M1組)、甘露醇2組(M2組)和甘露醇3組(M3組)各48只,行液壓沖擊并分別于液壓沖擊后按相應(yīng)劑量每6小時一次尾靜脈注入甘露醇。
　　 NC組和SO組于術(shù)后,BI組、M1組、M2組和M3組分別于術(shù)后第1h、6h、12h、24h、3d和7d,各隨機(jī)選取8只,以10％水合氯醛麻醉

9、,斷頭處死,開顱取腦,經(jīng)損傷區(qū)切成3mm厚冠狀腦片,置于4％多聚甲醛固定液中后固定24h,常規(guī)脫水、石蠟包埋,4μm切片,行HE染色和免疫組織化學(xué)染色方法檢測AQP4。從損傷區(qū)前緣取100mg左右腦組織應(yīng)用干濕重法測腦組織含水量。損傷區(qū)后緣腦組織矢狀分為2部分,分別用于Western Blot檢測AQP4蛋白和RT-PCR檢測AQP4mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1 大鼠腦含水量
　　 M1組、M2組和M3

10、組分別與BI組相應(yīng)時間點(diǎn)相比,1h均稍低于BI組(P＞0.05),6h后接近并稍高于BI組(P＞0.05),12h后升高(81.91±0.630,82.07±0.846,82.38±0.871),24h時顯著升高(85.62±0.918,85.77±1.075,86.00±0.962,P＜0.05),3d達(dá)到高峰(86.18±0.817,86.21±1.375,86.50±0.767,P＜0.05),7d時降低(84.26±1.006,

11、84.51±0.660,84.67±1.125),仍高于BI組(P＜0.05)。M1組、M2組和M3組組間相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2 免疫組化
　　 M1組、M2組和M3組分別與BI組相比,1h均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),6h稍高于BI組,12h后顯著升高(968.00±145.25,1003.4±169.91,1058.6±218.26,P＜0.05),24h至3d達(dá)到高峰(1429.8±2

12、06.26,1456.8±159.38,1483.0±117.00,P＜0.05),7d后降低(779.00±129.29,833.60±165.34,856.40±194.45),但仍高于BI組(P＜0.05)。M1組、M2組和M3組組間相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3 Western Blot
　　 M1組、M2組和M3組分別與BI組相比,6h稍高(P＞0.05),12h明顯高于BI組(0.573±

13、0.026,0.598±0.025,0.607±0.033,P＜0.05),24h至3d達(dá)到高峰(0.906±0.022,0.928±0.015,0.930±0.016,P＜0.05),7d后降低(0.641±0.049,0.663±0.021,0.666±0.027),但仍高于BI組(P＜0.05)。M1組、M2組和M3組組間相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4 RT-PCR
　　 M1組、M2組和M3組

14、分別與BI組相比,6h升高,12h后顯著升高(0.782±0.024,0.801±0.059,0.820±0.019,P＜0.05),24h至3d達(dá)到高峰(0.916±0.083,0.923±0.056,0.929±0.080,P＜0.05),7d后降低,但仍高于BI組(P＜0.05)。M1組、M2組和M3組組間相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1 大鼠液壓沖擊腦損傷后,應(yīng)用甘露醇可使AQP4