房顫患者心房肌細(xì)胞鈣調(diào)控蛋白表達(dá)及其基因轉(zhuǎn)錄的研究.pdf

1、心房纖顫(atrial fibrillation，簡(jiǎn)稱房顫)業(yè)已成為最常見的心律失常之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，60歲以上人群中，房顫發(fā)生率高達(dá)1％，并隨年齡而增加。其臨床意義主要在于對(duì)血流動(dòng)力學(xué)的影響和較高的體循環(huán)栓塞發(fā)生率。據(jù)報(bào)道房顫時(shí)心排血量減少達(dá)25％或以上；無瓣膜病合并房顫較無房顫者，腦卒中發(fā)生機(jī)會(huì)高5～7倍，而瓣膜病房顫腦栓塞發(fā)生率更高，但迄今為止，其發(fā)生和維持機(jī)制仍未完全闡明，故無論是藥物、射頻消融、雙心房起搏、外科手術(shù)或植入式心房除顫

2、器等手段，對(duì)房顫的復(fù)律和預(yù)防、竇性心律維持、心室率控制乃至栓塞的預(yù)防和治療，均未取得突破性進(jìn)展，給患者、家庭、單位、社會(huì)、國(guó)家?guī)砹藰O大的痛苦與沉重的負(fù)擔(dān)，業(yè)已與慢性心力衰竭一起成為21世紀(jì)全球心血管病學(xué)工作者面臨的重大挑戰(zhàn)。 國(guó)內(nèi)外研究表明，房顫的自然史隨著時(shí)間的推移趨于惡化，即：陣發(fā)性房顫的發(fā)作會(huì)隨著時(shí)間的推移趨于頻繁、持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，并常進(jìn)展為持續(xù)性或慢性房顫；房顫病程越短，藥物或電復(fù)律的成功率越高。這些發(fā)現(xiàn)提示房顫發(fā)作本身

3、會(huì)改變心房的特性，增加房顫維持和復(fù)發(fā)的可能性。這種由房顫誘發(fā)的心房電生理改變促進(jìn)了房顫的發(fā)生和永久化，被稱為心房電生理重構(gòu)(electrophysiological remodeling，EPR)。EPR公認(rèn)的最重要特征是心房動(dòng)作電位時(shí)程及不應(yīng)期縮短，而心肌細(xì)胞外向電流的凈增或內(nèi)向電流的凈減均可使動(dòng)作電位和不應(yīng)期縮短。房顫時(shí)持續(xù)快速心房率會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)鈣超載，其可能機(jī)制包括心房快速去極化、T-型Ca2+內(nèi)流增加、肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶(

4、SR Ca2+-ATPase)mRNA表達(dá)下降等諸多因素。隨著內(nèi)向鈣離子流的高速率及細(xì)胞缺乏適應(yīng)性反應(yīng)，鈣超載就會(huì)達(dá)到威脅細(xì)胞活力的程度，通過負(fù)反饋機(jī)制，引起L型鈣離子流(Ica)顯著的功能性下降，并誘導(dǎo)L型鈣通道(L-type Ca2+)蛋白表達(dá)的下調(diào)，從而引發(fā)通道結(jié)構(gòu)本身的變化。這就使細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度下降，動(dòng)作電位平臺(tái)期縮短，EPR發(fā)生，房顫得以復(fù)發(fā)、維持。迄今為止，國(guó)外對(duì)房顫?rùn)C(jī)制的研究多見于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，人體研究尚不多見，且鮮見對(duì)同

5、一組病例L型鈣通道和肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶蛋白質(zhì)表達(dá)研究的報(bào)道；國(guó)內(nèi)對(duì)房顫患者L型鈣通道和肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶表達(dá)的研究則更為少見。 目的：通過對(duì)房顫患者和竇性心律對(duì)照者心肌細(xì)胞的主要鈣離子(ca2+)調(diào)控蛋白-細(xì)胞膜L型-Ca2+通道和肌漿網(wǎng)Ca2+-ATPase表達(dá)的研究，探討房顫發(fā)生和維持的分子生物學(xué)機(jī)制，掀開房顫發(fā)生及維持機(jī)制的冰山一角，以期為有效防治房顫的后續(xù)研究奠定基石出。 方法：63例行心臟手術(shù)的病人

6、(包括慢性房顫、陣發(fā)性房顫和竇性心律三組)，術(shù)中取右心耳和(或)左房標(biāo)本約200mg，立即液氮速凍，-70℃存?zhèn)溆茫g(shù)前術(shù)后收集詳細(xì)臨床資料。提取蛋白并測(cè)定樣本總蛋白濃度，采用western印跡法(Western-blotting)測(cè)定心房肌L型-Ca2+通道和Ca2+-ATPase的表達(dá)。用Trizol法提取心房肌組織的總RNA，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法測(cè)定心房肌L型-Ca2+通道和ca2+-ATPase mRNA含量。

7、 結(jié)果： 1、臨床資料的比較：各組患者的年齡、左心室內(nèi)徑、左心室后壁厚度、室間隔厚度、心功能(左室射血分?jǐn)?shù))無明顯的差別(P＞0.05)，但房顫組與陣發(fā)性房顫組的左心房?jī)?nèi)徑明顯大于竇性心律非瓣膜病組和或竇型性心律瓣膜病組(P＜0.05)，且慢性房顫組增大尤為明顯，竇性心律瓣膜病組的左心房?jī)?nèi)徑也較竇性心律非瓣膜病組大，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 2、各L-type Ca2+和SR Ca2+-ATPase蛋

8、白水平的改變：與竇性非瓣膜病組和竇性瓣膜病組比較，慢性房顫組L-type Ca2+/GAPDH和SRca2+-ATPase/GAPDH的蛋白比值在慢性房顫患者中較對(duì)照組下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中，L-type Ca2+/GAPDH的下降在左右心房均p＜0.01，SR Ca2+-ATPase/GAPDH降低在左心房p＜0.01，而右心耳p＜0.05。陣發(fā)性房顫患者L-type Ca2+和sR Ca2+-ATPase蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較亦

9、見降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。二者在左右心房組織問表達(dá)一致，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 3、各組L-type Ca2+和SR Ca2+-ATPase mRNA水平的改變： 與竇性非瓣膜病組和竇性瓣膜病組比較，慢性房顫組L-type Ca2+和SR Ca2+-ATPasemRNA水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01和＜0.05)，但在左右心房組織間表達(dá)一致，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；L-t

10、ype Ca2+和SR Ca2+-ATPase mRNA表達(dá)在陣發(fā)性房顫組患者中亦見降低，但未見有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的改變(P＞0.05)． 結(jié)論： 1、L-type Ca2+和sR Ca2+-ATPase的mRNA及蛋白含量在慢性房顫患者中均顯著下降。 2、L-type Ca2+和SR Ca2+-ATPase的mRNA及蛋白含量?jī)H在慢性房顫患者中有顯著改變，陣發(fā)性房顫患者中無顯著改變。 3、左右心房組織L-ty