高級(jí)氧化蛋白產(chǎn)物（AOPPs）的表征.pdf

1、自由基攻擊血漿蛋白，引起后者發(fā)生氧化修飾而生成一種新型尿毒癥標(biāo)志一高級(jí)氧化蛋白產(chǎn)物(AOPPs，AdvancedOxidativeProteinProducts)。其中，血漿白蛋白作為人體內(nèi)生物大分子抗氧化體系中的主要組成部分是自由基攻擊的主要對(duì)象。先前的研究已證明尿毒癥病人血漿白蛋白發(fā)生氧化修飾高于正常人，為了解自由基攻擊對(duì)白蛋白分子結(jié)構(gòu)產(chǎn)生何種影響，本文對(duì)正常人和尿毒癥病人血漿白蛋白的氨基酸組成進(jìn)行了分析。方法：以正常人為對(duì)照組、尿

2、毒癥病人為實(shí)驗(yàn)組，AOPPs和羰基為氧化應(yīng)激指標(biāo)，先對(duì)各組的氧化應(yīng)激水平進(jìn)行評(píng)價(jià)。隨后應(yīng)用二維色譜法從各組血漿中分離、純化出白蛋白，并對(duì)分離、純化的色譜條件進(jìn)行優(yōu)化分析。色譜條件的優(yōu)化包括流速、蛋白載量、溫度、離子強(qiáng)度、有機(jī)改性劑用量等。第一維色譜采用高效凝膠色譜法(HP-SEC)，第二維色譜采用反相色譜法(RP-HPLC)。純化出的血漿白蛋白經(jīng)過(guò)HP-SEC、RP-HPLC、克分子吸光系數(shù)等方法進(jìn)行純度鑒別。獲得高純的血漿白蛋白后，再

3、對(duì)其氨基酸組成進(jìn)行分析比較。結(jié)果：尿毒癥病人的AOPP水平要高出正常人的近一倍(正常人～病人=71．07+13．90～161．91+19．89，p<0．001)，羰基水平也高出正常人一倍(正常人～病人=0．75±0．07～1．64±O．13，p<0．001)。已知人白蛋白的克分子吸光系數(shù)口￡280cm=35,200M-1cm-1，測(cè)得用作對(duì)照的標(biāo)準(zhǔn)白蛋白的克分子吸光系數(shù)為355¨+528Mqcm-1(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差=O．9％)，測(cè)得純化后

4、的血漿白蛋白為33205+1618M-1cm-1(相對(duì)偏差=5．7％)。說(shuō)明經(jīng)二維色譜純化獲得的的白蛋白純度較高。隨后的白蛋白氨基酸組成分析證明，同正常人相比，尿毒癥病人水解出的17種白蛋白氨基酸組成大部分要低10％左右，其中胱氨酸和精氨酸在二組間有顯著性統(tǒng)計(jì)差異(正常人～尿毒癥病人：精氨酸：2．16士O．13vs．1．87土0．17，p<0．05；胱氨酸：0．284-0．06vs．0．17+0．02，p<0．05)。結(jié)論尿毒癥患者中氨