非綜合征性聾Myo6基因突變特征及促紅細(xì)胞生成素對(duì)耳聾作用的研究.pdf

1、本文分為三部分：
　　 第一部分：My06突變與非綜合征性語(yǔ)前聾相關(guān)性研究
　　 研究背景：人類從外界獲取的信息中30％來(lái)自聽覺，聽力喪失無(wú)疑嚴(yán)重影響人類的生活質(zhì)量，并且伴隨人的一生。耳聾是人類最常見的感覺神經(jīng)系統(tǒng)缺陷。學(xué)語(yǔ)前耳聾是兒童的常見疾病，可導(dǎo)致患兒語(yǔ)言交流障礙，嚴(yán)重影響患兒的語(yǔ)言、智力、身心健康等的發(fā)育，影響著我國(guó)人口素質(zhì)。據(jù)估計(jì)每1000名新生兒中就有1名先天性耳聾患者，隨著年齡的增加，永久性耳聾患兒持續(xù)增加

2、，5歲前耳聾患兒的發(fā)病率上升到2．7‰。其中60％為遺傳性聾，而不伴隨全身其他癥狀的非綜合征性聾(nonsyndromic hearing impairment NSHI)約占遺傳性耳聾的70％。引起耳聾的病因很多，其中遺傳因素是不可忽視的病因。目前已發(fā)現(xiàn)許多基因突變與耳聾有關(guān)，現(xiàn)已知非綜合征性致聾基因有62個(gè)，其中隱性遺傳致病基因37個(gè)，顯性遺傳基因25個(gè)。而所有遺傳因素和環(huán)境因素致聾在同一種族以及不同種族之間會(huì)有極大的差異，即遺傳異

3、質(zhì)性。語(yǔ)前聾的發(fā)病原因及其發(fā)病機(jī)制一直是國(guó)內(nèi)外耳鼻咽喉科醫(yī)師、分子生物學(xué)家、遺傳優(yōu)生醫(yī)師和學(xué)者們共同關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題。
　　 目的：探討中國(guó)兒童非綜合征性學(xué)語(yǔ)前聾患者肌球蛋白6(myosin 6，My06)基因的突變頻率和特性，探討My06在非綜合征性耳聾的作用。
　　 方法：收集非綜合征性學(xué)語(yǔ)前聾患兒及其母親各41個(gè)及聽力正常兒童50例，患兒家庭大部分來(lái)自廣東地區(qū)，共計(jì)132例；聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增肌球蛋白6基因的外顯子，變

4、性梯度凝膠電泳(denaturing Gradient Gel electrophoresis，DGGE)篩查變異，發(fā)現(xiàn)異常構(gòu)象帶后再行DNA測(cè)序確定是否存在突變和檢測(cè)突變的位點(diǎn)。
　　 結(jié)果：在2個(gè)患兒母親和1例患兒中檢測(cè)出了My06基因突變。10號(hào)樣本為患兒家長(zhǎng)，My06基因9號(hào)外顯子雜合突變738T-T/C，其編碼的氨基酸無(wú)改變，為無(wú)義突變。
　　17號(hào)樣本為患兒家長(zhǎng)，有兩個(gè)突變位點(diǎn)：My06基因9號(hào)外顯子雜合突變

5、739A-A/G，其編碼氨基酸發(fā)生了改變Ile-Val[異亮氨酸-頡氨酸]，為錯(cuò)義突變；My06基因13號(hào)外顯子雜合突變1292T-T/C，其編碼氨基酸發(fā)生了改變leu-*pro[亮氨酸-脯氨酸]，為錯(cuò)義突變。33號(hào)樣本為患兒，有兩突變位點(diǎn)：My06基因9號(hào)外顯子雜合突變711T-T/C，其編碼氨基酸沒發(fā)生改變，為無(wú)義突變；32號(hào)外顯子純合突變3281A-'-G，其編碼的氨基酸發(fā)生了改變Asp-Gly[天冬氨酸-甘氨酸]，為錯(cuò)義突變。并

6、且17號(hào)和33號(hào)是母子關(guān)系。
　　 結(jié)論：My06基因的純合錯(cuò)義突變(3281A-G)很可能是導(dǎo)致非綜合征性學(xué)語(yǔ)前聾的一個(gè)新突變，屬于常染色體隱性遺傳。
　　 第二部分：促紅細(xì)胞生成素對(duì)豚鼠耳蝸傳入神經(jīng)元毒性損傷的影響
　　 研究背景：根據(jù)聽覺系統(tǒng)所受影響的性質(zhì)、原因和病變位置可將耳聾分為傳導(dǎo)性聾、感音神經(jīng)性聾和二者兼有的混合性聾3大類。由外耳和(或)中耳疾病或結(jié)構(gòu)異常所致的集音或傳音障礙引起的聽覺功能減退稱為傳

7、導(dǎo)性耳聾可通過(guò)聽力重建手術(shù)來(lái)保存和恢復(fù)聽力，而感音神經(jīng)性耳聾是一大類常見的難治性、致殘性疾病，由于缺乏有效治療方法，因聾致殘者不在少數(shù)。而降低感音神經(jīng)性耳聾發(fā)病率最有效的策略是控制耳聾的增加和提供有效的治療方法。近年已證實(shí)，谷氨酸興奮毒性是神經(jīng)系統(tǒng)損傷的主要病理機(jī)制之一，各種原因引起的耳蝸缺血或噪聲損傷的一個(gè)重要致聾機(jī)理是谷氨酸(glutamate，Glu)興奮毒性對(duì)耳蝸的損害，即：上述病例狀態(tài)下耳蝸內(nèi)毛細(xì)胞釋放興奮性傳入神經(jīng)遞質(zhì)Glu

8、過(guò)多或／和回收不充分，谷氨酸與突觸后膜受體的作用，導(dǎo)致神經(jīng)元過(guò)度興奮，鈣超載、細(xì)胞內(nèi)氧自由基的增多，導(dǎo)致以傳入神經(jīng)元樹突水腫為特征的興奮性損害而導(dǎo)致神經(jīng)元的大量死亡，出現(xiàn)大幅聽力下降，重者因遲發(fā)性傳入神經(jīng)元死亡致不可逆神經(jīng)性聾。因此減少神經(jīng)元的凋亡是最直接和最有效的治療措施。
　　 目的：觀察谷氨酸致豚鼠耳蝸傳入神經(jīng)元興奮毒性損傷后，耳蝸局部灌注促紅細(xì)胞生成素(Erythropoietin，EPO)對(duì)耳蝸傳入神經(jīng)元的電生理(復(fù)合

9、動(dòng)作電位CAP)的影響。
　　 方法：26只豚鼠分為4組。第一組(8只)：先用微量輸液泵經(jīng)鼓階持續(xù)性灌注谷氨酸(glutamate，Glu 20mmol/1，fOul)。60分鐘后用微量滲透泵經(jīng)鼓階持續(xù)性灌注EPO(0.1U／m1，流速0.5ul/h)14天，作為實(shí)驗(yàn)組(EPO組)；第二組(8只)：經(jīng)鼓階灌注谷氨酸(20mmol/1，lOul)作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(Glu組)；第三組(5只)：用微量滲透泵經(jīng)鼓階灌注Hanks液做為正常

10、對(duì)照組(HBSS組)；第四組(5只豚鼠)：不作任何灌注作為空白對(duì)照組(Blank組)。EPO組、Glu組和HBSS組分別在術(shù)后1天、術(shù)后4周測(cè)CAP反應(yīng)閾，空白對(duì)照組測(cè)CAP反應(yīng)閾后處死。
　　結(jié)果：1、術(shù)后1天EPO組、Glu組CAP反應(yīng)閡增高，與HBSS和Blank組有顯著性差異(P<0.01)；2、術(shù)后4周EPO組CAP反應(yīng)閾無(wú)降低；3、HBSS組、Blank組CAP反應(yīng)閾無(wú)顯著性差異(P>O.05)。
　　 結(jié)論

11、：1．局部灌注谷氨酸對(duì)螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞有明顯的神經(jīng)毒性；2．局部灌注EPO沒有起到對(duì)耳蝸神經(jīng)節(jié)的保護(hù)作用。
　　 第三部分：3歲以內(nèi)嬰幼兒氣管／支氣管異物的異同點(diǎn)比較
　　 研究背景:3歲以內(nèi)的嬰幼兒常常容易把能拿到的一些小食物含在口中，而磨牙系統(tǒng)發(fā)育不完善、喉的保護(hù)功能不健全、缺少咀嚼和活潑好動(dòng)、哭笑等性格因素，在缺少監(jiān)護(hù)或者監(jiān)護(hù)不力及其他意外等情況時(shí)易出現(xiàn)誤吸而導(dǎo)致氣管/支氣管異物的發(fā)生。3歲以內(nèi)的嬰幼兒是最易發(fā)生氣管

12、和支氣管異物的人群，其中該年齡段7％嬰幼兒的意外死亡與誤吸異物有關(guān)，但即使都是氣管異物患兒，不同年齡段的特點(diǎn)也不盡相同，3歲以內(nèi)不同年齡段患兒氣管異物發(fā)病機(jī)制和臨床表現(xiàn)的差異少有研究和報(bào)道。
　　 目的:通過(guò)比較3歲以內(nèi)嬰幼兒氣管/支氣管異物的臨床資料，總結(jié)3歲以內(nèi)嬰幼兒每一年齡段誤吸異物后各自臨床表現(xiàn)和差異，總結(jié)3歲以內(nèi)嬰幼兒氣管/支氣管異物的臨床特點(diǎn)，以進(jìn)一步提高診療水平。
　　 方法:回顧性分析2004年1月～20

13、08年12月間在深圳市兒童醫(yī)院確診和治療的3歲以內(nèi)的嬰幼兒氣管、支氣管異物316例的臨床資料。通過(guò)比較不同組別患兒的性別、年齡、異物分布部位、治療史、異物吸入史，異物種類和致死原因等，同時(shí)還分析合并并發(fā)癥患兒異物在體內(nèi)滯留時(shí)間及異物取出的后果差異。
　　 結(jié)果:1歲以內(nèi)嬰兒有52例（中位數(shù)年齡為10個(gè)月，A組），1～2歲患兒199例（中位數(shù)年齡為17個(gè)月，B組），2～3歲患兒65例（中位數(shù)年齡30個(gè)月，C組）。A組有明確異物誤吸

14、史者有38例(73.1％)，較B組(55.8％)和C組(53.8％)高(P＜0.05)。最常見的異物為花生（171例，54.1％）;其次為瓜子（包括葵瓜子、西瓜子和南瓜子）62例(19.6％);第三位異物種類為動(dòng)物性異物有35例(11.1％)（包括16例豬骨，8例魚骨，7例雞骨和4例其他動(dòng)物肉），且A組動(dòng)物性異物的發(fā)生比例明顯高于B和C組(P＜0.01)。最少的異物種類為無(wú)機(jī)異物，共5例（圖釘一個(gè)，橡皮擦一個(gè)，螺絲釘一個(gè)，小石子一個(gè)，塑

15、料玩具一個(gè)）。異物于支氣管內(nèi)的分布沒有明顯的左、右側(cè)差異，左側(cè)異物發(fā)生率為41.8％，右側(cè)異物發(fā)生率為40.5％，三組不同年齡段患兒異物左、右側(cè)分布也無(wú)顯著性差異。數(shù)據(jù)顯示，A組（0-1歲）患兒24小時(shí)內(nèi)被送往醫(yī)院接受治療比例(50％)最高(P＜0.01)。本組病例中有5個(gè)患兒（死亡率:1.58％）因誤吸異物而死。
　　 結(jié)論:在中國(guó)南方1歲以內(nèi)嬰兒階段最常見的異物為動(dòng)物性異物。最易發(fā)生氣管/支氣管異物的人群為1至2歲的幼兒。3