HIV感染中髓樣樹突狀細胞數(shù)量減少的機制及功能改變研究.pdf

1、自1983年首次發(fā)現(xiàn)HIV以來，HIV/AIDS已成為嚴重危害人類健康的傳染病。免疫反應(yīng)對HIV感染后的發(fā)病及預(yù)后均有重要影響。髓樣樹突狀細胞(mDC)作為專職的抗原遞呈細胞，是連接固有免疫和適應(yīng)性免疫的橋梁。HIV感染者中mDC的變化直接影響著免疫反應(yīng)的質(zhì)與量。目前已有多位學(xué)者報道HIV感染者外周血中mDC數(shù)量減少，但是發(fā)生機制不明確；同時，HIV感染中mDC的功能變化尚不清楚，為進一步明確HIV感染中mDC數(shù)量減少的機制以及mDC的

2、功能變化，我們進行了以下兩部分研究。
　　 第一部分：正如其他學(xué)者之前報道的HIV感染中mDC數(shù)量減少一樣，本文也發(fā)現(xiàn)了同樣現(xiàn)象。但是mDC數(shù)量減少的機制尚不明確，有待進一步闡明。我們就此進行了研究。本部分研究選取了14例HIV感染者及10例健康志愿者，采集并分離外周血單個核細胞。我們通過流式細胞術(shù)檢測mDC中凋亡通路的上游關(guān)鍵酶--活化的caspase8和caspase9的表達并對比兩組的差異。我們也檢測了死亡受體FAS、DR

3、4、DR5和死亡配體FASL、TRAIL以及歸巢受體CCR7在各組細胞中表達。我們觀察到HIV感染者外周血mDC數(shù)量顯著低于健康人，而CCR7在mDC中的表達則顯著高于健康人。我們發(fā)現(xiàn)相比健康人，HIV感染者外周血中表達活化的caspase8和caspase9的mDC的比例均顯著增加。HIV感染者中mDC數(shù)量與表達活化的caspase8的mDC比例呈負相關(guān)，而與表達活化的caspase9的mDC比例無顯著相關(guān)性。同時，HIV感染者外周血

4、表達活化的caspase8和caspase9的CD4 T淋巴細胞、CD8 T淋巴細胞和B淋巴細胞比例也均顯著高于健康人。HIV感染者表面表達死亡配體FASL的mDC、CD4T淋巴細胞、CD8 T淋巴細胞以及B淋巴細胞的比例均顯著高于健康人，而表達DR4、DR5以及TRAIL的細胞比例無顯著變化。另外，我們用免疫磁珠分離了14例健康志愿者的mDC，并用HIV-1 Bal株感染mDC。我們發(fā)現(xiàn)經(jīng)與HIV共培養(yǎng)后，mDC中活化的caspase

5、8和caspase9的表達顯著上調(diào)，而死亡受體和配體表達無顯著變化。我們的實驗證明細胞凋亡是導(dǎo)致HIV感染者外周血mDC減少的重要原因。HIV感染中的mDC凋亡同時涉及到細胞內(nèi)凋亡途徑和細胞外凋亡途徑，而其中細胞外凋亡途徑的活化更是直接影響到mDC數(shù)量。我們的實驗也提示mDC遷移至淋巴結(jié)是致HIV感染者外周血mDC數(shù)量減少的原因之一。
　　 第二部分：mDC誘導(dǎo)過弱的免疫反應(yīng)將無法控制HIV復(fù)制，而過強的免疫反應(yīng)將導(dǎo)致全身免疫激

6、活。HIV感染后mDC功能改變目前尚有爭論。另外HIV刺激的pDC通過IDO使幼稚性T淋巴細胞向Treg分化，從而破壞Th17/Treg平衡。而IDO在mDC中表達最多，但mDC對Th17/Treg分化中的影響卻不清楚。為了明確HIV感染后mDC誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的變化以及mDC對Th17/Treg的影響，我們進行了第二部分的研究。我們研究了HIV刺激對mDC誘導(dǎo)幼稚性T淋巴細胞增殖和分化方向的影響。我們用磁珠法分離了10例健康人mDC，并用

7、HIV-1 Bal共培養(yǎng)刺激。之后我們將用免疫磁珠分離的同種異體的幼稚性T淋巴細胞加入到mDC中進行混合淋巴細胞反應(yīng)。共培養(yǎng)5天后，我們觀察幼稚性T淋巴細胞的增殖情況以及Th17細胞和Treg細胞的分化結(jié)果。我們發(fā)現(xiàn)經(jīng)HIV組幼稚性T淋巴細胞增殖比例明顯高于對照組，但活化的CD8 T淋巴細胞比例與對照組無顯著差異。而HIV組與對照組見的Th17細胞、Treg細胞以及Th17/Treg比例均無顯著變化。我們的實驗顯示HIV刺激后的mDC誘