新斯的明對經(jīng)銀環(huán)蛇毒素處理后的離體大鼠膈肌肌條張力的影響.pdf

1、背景和目的：
　　我國每年蛇傷病例約30萬例，病死率3-5％。特別是華南地區(qū)，毒蛇傷是常見急癥之一，其中銀環(huán)蛇咬傷占各類毒蛇咬傷的8.12%[1，2]。銀環(huán)蛇毒素以神經(jīng)毒素為主[3,4,5]，干毒包含多種成分，如α-銀環(huán)蛇毒素、β-銀環(huán)蛇毒素、κ-銀環(huán)蛇毒素、P-銀環(huán)蛇毒素[6,7]等，毒性強，中毒者常因神經(jīng)肌肉傳導(dǎo)阻滯表現(xiàn)為的骨骼肌無力，臨床骨骼肌無力癥狀出現(xiàn)的順序為先見眼瞼下垂、后可有吞咽困難、流涎，繼而四肢肌力減弱甚至癱瘓，

2、嚴(yán)重者可因呼吸肌麻痹造成窒息死亡,癥狀恢復(fù)順序與出現(xiàn)順序相反。
　　目前國際公認(rèn)的治療蛇咬傷的方法是傷口局部處理及盡早使用抗蛇毒血清，嚴(yán)重者影響到呼吸功能時需要機械輔助通氣、血液灌流及恢復(fù)肌力的藥物等治療。鑒于蛇咬傷常發(fā)生在山區(qū)、郊外等地，地方醫(yī)院不能常規(guī)配備抗蛇毒血清，使得抗蛇毒血清無法得到普遍推廣和應(yīng)用。故尋求更多的治療方法即能安全、廣泛的使用，又能為蛇咬傷病人爭取更多的救治時間是十分必要的。在以往的報道中，新斯的明拮抗銀環(huán)蛇

3、成分毒素（例如：α-銀環(huán)蛇毒素、β-銀環(huán)蛇毒素等）或其他蛇毒神經(jīng)毒素所致骨骼肌無力的影響尚存爭議[8]。又有相關(guān)研究表明，新斯的明在拮抗其他因神經(jīng)肌肉傳導(dǎo)阻滯而出現(xiàn)骨骼肌無力的疾病中療效確切，例如非去極化肌松劑所致的骨骼肌無力[9,10，11]。曾有試驗將多種蛇毒神經(jīng)毒素與非去極化肌松劑（如筒箭毒堿）進行對比[8]，多項結(jié)果顯示其致病機制是及其相似的。而目前有關(guān)新斯的明拮抗銀環(huán)蛇干毒所致骨骼肌無力的影響尚鮮有實驗論證。偶有臨床報道新斯的

4、明在治療神經(jīng)毒素為主的蛇咬傷疾病時可減少呼吸機的應(yīng)用[12]。
　　本項研究旨在通過檢測不同濃度新斯的明對經(jīng)銀環(huán)蛇毒素處理后的大鼠膈肌肌條張力的改變，明確新斯的明是否可改善骨骼肌肌力。
　　方法：
　　將健康SPF級雌性SD大鼠20只，隨機分為四組（n=5）:正常對照組（A組）、1μM新斯的明（B組）、3μM新斯的明（C組）、10μM新斯的明（D組）。A組給予生理鹽水作為正常對照組。實驗大鼠均經(jīng)戊巴比妥鈉腹腔麻醉，取出

5、膈肌并去除周圍的殘留血液、脂肪組織等后，將膈肌沿肌纖維方向分離制成實驗用肌條（約1cmX1.5cm）。肌條一端連于高精度張力換能器，通過放大器由生理記錄儀記錄張力大小。另一端固定于固定桿上并使整個肌條浸于注有苛氏液的麥?zhǔn)喜壑校壑谐掷m(xù)通入混合氣（95%O2，5%CO2），溫度維持37℃。固定后持續(xù)調(diào)節(jié)膈肌肌條前負(fù)荷為1g，平衡45-60分鐘，每15分鐘更換苛氏液一次[8]。平衡后用10-4M濃度的乙酰膽堿刺激兩次，待再次達(dá)到平衡后，最終

6、選擇肌條張力維持在＜（1±10%）g[13]范圍內(nèi)的肌條作為實驗用肌條。繼續(xù)給予銀環(huán)蛇干毒毒素（濃度：5μg/ml），5分鐘后沖洗并給予不同濃度的新斯的明（1μM、3μM、10μM）或生理鹽水（對照組)。記錄不同時間段（5min、10min、15min、30min、60min）膈肌肌條張力(g)大小。
　　結(jié)果：
　　不同時間段A組、B組、C組、D組的肌條張力如下,5min時分別為:（0.846±0.019）g、（0.853

7、±0.027）g、（0.853±0.024）g、（0.858±0.013） g；10min時分別為：（0.844±0.023）g、（0.860±0.033）g、（0.863±0.030）g、（0.912±0.026）g；15min時分別為：（0.846±0.033）g、（0.870±0.033）g、（0.873±0.024）g、（0.920±0.025）g；30min時分別為：（0.848±0.019）g、（0.870±0.029）g、

8、（0.888±0.036）g、（0.932±0.013）g；60min時分別為：（0.860±0.024）g、（0.883±0.031）g、（0.908±0.032）g、（0.954±0.015） g。
　?。?）與對照組（A組）比較：B組與A組在各時間段檢測結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）;C組與A組在60min時檢測結(jié)果存在統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。D組與A組在10min、15min、30min、60min時檢測結(jié)果存在統(tǒng)

9、計學(xué)差異（P≤0.01）。
　?。?）與B組比較：C組與B組在各時間段檢測結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）;D組與B組在10min、15min、30min、60min時檢測結(jié)果存在統(tǒng)計學(xué)差異。（10min、15min時，P<0.05；30min、60min時，P≤0.01）。
　?。?）與C組比較：D組與C組在60min時檢測結(jié)果存在統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　?。?）實驗各組肌條的張力在不同時間段均有不同程度的