Rα97-116（V108A）鼻粘膜耐受對實驗性自身免疫性重癥肌無力的影響.pdf

1、目的： 1．研究鼠源乙酰膽堿受體抗體α亞基97-116(Rα97-116)誘導建立實驗性自身免疫性重癥肌無力(EAMG)動物模型的可能性，為MG的基礎研究提供簡便實用的動物模型。 2．研究Rα97-116誘導的實驗性自身免疫性重癥肌無力(EAMG)Lewis鼠外周血CD28∶CTLA4/B7表達水平，探討CD28∶CTLA4/B7在重癥肌無力(MG)免疫病因機制中的作用。 3．研究Rα97-116(V108A)鼻

2、粘膜耐受對EAMG臨床及免疫功能的影響。 方法： 采用人工合成的Rα97-116肽段與完全氟氏佐劑(CFA)充分乳化后多點皮下注入6-8周齡雌性Lewis鼠，并在第30、60天強化注射與不完全氟氏佐劑(IFA)充分混合后的等量肽段構建EAMG鼠模型。對照組同期注入等量的磷酸鹽緩沖液(PBS)。通過觀察實驗鼠體重變化，并進行Lennon臨床評分；通過低頻重復電刺激檢查電衰減反應和ELISA法檢測血清AchR-Ab滴度變化來

3、確定EAMG是否成模。并于第三次免疫后第5天，采用流式細胞儀檢測EAMG組和對照組CD28、B7-2、B7-1、CTLA-4在外周血、淋巴細胞、單核細胞中的表達；第三次免疫Lewis鼠8天后，將22只成模的EAMG Lewis鼠隨機分成耐受組和對照組，分別經鼻粘膜給與Rα97-116(V108A)和PBS緩沖液免疫耐受處理10天后，觀察不同時間點二組Lewis鼠體質量、Lennon肌無力評分、血清AchR-Ab及CD28∶CTLA4/B

4、7共刺激分子變化。 結果： 1.EAMG組中75％Lewis鼠Lennon臨床評分在1級以上，3、5 Hz低頻重復電刺激陽性電衰減反應D5>10％及血清AchR-Ab滴度與正常對照血清比值>2.1。證實了實驗動物EAMG成模率達75％。 2. 與對照組比較，EAMG組外周血CD28、B7-2 B7-1、CTLA-4分子的表達水平均增加(p<0.05)。 3.EAMG組中CD28、CTLA-4主要在淋巴細胞

5、表達增加，其與對照組比較有顯著差異性(p<0.05、0.01)，而在單核細胞表達雖有增高，但與對照組比較無顯著差異性(p>0.05)；B7-1、B7-2在淋巴細胞、單核細胞表達均增加，兩組比較具有顯著差異性(p<0.01、0.05)。 4.經Ra97-116(V108A)鼻粘膜耐受治療后第20天，治療組EAMG大鼠體重較對照組鼠明顯增加，具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。 5.EAMG大鼠經Rα97-116(V108A)鼻

6、粘膜耐受治療后第10天，治療組臨床評分下降，與對照組比較具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。 6.Rα97-116(V108A)鼻粘膜耐受治療后第16天，治療組AchR-AblgG(0.97±0.20)含量明顯下降，與對照組(1.27±0.26)比較有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。 7.Rα97-116(V108A)鼻粘膜耐受治療后第10天，治療組CD28、CTLA4、B7-1、B7-2表達陽性細胞數明顯下降，與對照組比較有統(tǒng)

7、計學意義(p≤0.01)。 結論： 1.用人工合成鼠源肽段Rα97-116免疫Lewis鼠可成功誘導EAMG模型，成模率約75％。該實驗動物模型為MG的基礎研究奠定了基礎。 2.EAMG大鼠存在CD28∶CTLA4/B7共刺激分子表達異常，CD28∶CTLA4/B7共刺激通路異常反映了機體免疫狀態(tài)，可能參與了EAMG的發(fā)生和發(fā)展具有密切的關系。 3.Ra97-116(V108A)鼻粘膜耐受能明顯改善EAM