乙型肝炎病毒聚合酶在重組腺病毒系統(tǒng)中的表達(dá).pdf

1、乙型肝炎是一個世界范圍的傳染病,在中國為害尤其嚴(yán)重.乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)作為引起人類急性、慢性肝炎的主要病原體之一,屬嗜肝DNA病毒科.雖然其基因組僅有3.2kb,但其復(fù)制和致病機(jī)理過程復(fù)雜,突變眾多,目前還沒有根治的方法.因此,發(fā)展抗乙肝藥物的研究顯得尤為必要.乙肝病毒聚合酶(HBV polymerase)是病毒復(fù)制的關(guān)鍵酶,具有TP(蛋白引物)、間隔區(qū)(刪除大部分后不影響功能)、RT(逆轉(zhuǎn)錄酶)

2、、RNaseH等多個功能區(qū)域,是抗乙肝藥物作用的理想位點(diǎn).乙肝聚合酶很難在感染細(xì)胞中分離純化,也一直很難在哺乳動物細(xì)胞中大量重組表達(dá),嚴(yán)重阻礙了抗乙肝藥物和乙肝疫苗的研究.該研究選取高復(fù)制型的臨床分離株HBV-56,克隆拼接了全長的多聚酶基因,并將其插入穿梭質(zhì)粒,通過重組穿梭質(zhì)粒在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)與帶有腺病毒基因組的質(zhì)粒發(fā)生同源重組,得到帶有HBV多聚酶的重組腺病毒質(zhì)粒.該質(zhì)粒線性化后轉(zhuǎn)染人胚腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞系293,成功地得到了重組腺病毒.用