人類細(xì)胞色素P450 2C9和EETs在高脂血癥發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、第一部分:CYP2C9基因型在健康人和高脂血癥病人中的分布;CYP2C9是一種重要的氧化酶,不僅參與臨床上多種常用藥物的代謝,而且參與包括雌激素在內(nèi)的多種內(nèi)源性物質(zhì)的轉(zhuǎn)化.現(xiàn)已知CYP2C9基因上有11種具有功能意義的單核苷酸多態(tài)性(SNP),依次被命名為CYP2C9<'*>2~<'*>12.在中國(guó)人群中,關(guān)于CYP2C9<'*>6的研究尚未開展,目前的研究中CYP2C9<'*>3是唯一常見的多態(tài)性.而近期報(bào)道的CYP2C9外顯子4上L

2、eu208Val等突變?nèi)孕柽M(jìn)一步驗(yàn)證.該實(shí)驗(yàn)是要確定CYP2C9<'*>3、<'*>6和外顯子4上Leu208Val突變?cè)诮】等撕透哐∪酥械念l率分布,進(jìn)行CYP2C9突變與高脂血癥的疾病相關(guān)性研究.運(yùn)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)的方法,我們對(duì)476名受試者進(jìn)行了CYP2C9<'*>3、<'*>6和外顯子4上Leu208Val突變的基因分型,包括211名高血脂病人和265名健康對(duì)照組,其中男性251人,女

3、性225人.結(jié)果,在該人群中未發(fā)現(xiàn)CYP2C9<'*>6和外顯子4上Leu208Val等突變;CYP2C9<'*>3在該人群中的基因頻率為0.039.有趣的是,我們發(fā)現(xiàn)在女性高血脂病人中發(fā)生CYP2C9<'*>3突變的頻率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于女性健康人群中的頻率(x<'2>=12.377,P<0.0001,OR=0.062,95％CI:0.008~0.476),攜帶CYP2C9<'*>3的女性不易發(fā)生高脂血癥.其機(jī)制可能是通過雌激素的作用.需要進(jìn)一

4、步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證和研究CYP2C9<'*>3與高脂血癥的疾病相關(guān)性存在女性特異性的機(jī)制.第二部分:高脂血癥病人和健康人血漿EETs水平的比較;在CYP2C9參與轉(zhuǎn)化的多種內(nèi)源性物質(zhì)中包括花生四烯酸(AA),使AA代謝生成環(huán)氧廿碳三烯酸(EET).體外研究發(fā)現(xiàn),高濃度的低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)能特異性地顯著增加EETs的合成.同時(shí)體外的研究證實(shí),環(huán)氧化物酶中CYP2C9的催化活性最強(qiáng)、分布最廣、表達(dá)酶量最多,是一種非常重要的EET合成

5、酶.該實(shí)驗(yàn)的目的是測(cè)定高血脂病人和健康人血漿中EETs及其羥化產(chǎn)物DHETs的濃度,比較高血脂病人與健康人之間、CYP2C9不同基因型的個(gè)體之間血漿EET濃度的差異,體內(nèi)證明CYP2C9是否為EET主要的合成酶.從前一實(shí)驗(yàn)中篩選出35名受試者,包括7名高LDL-C(LDL-C>4.50mmol/L)的高血脂病人和10名對(duì)照者,以及9名CYP2C9<'*>3雜合子健康個(gè)體和9名CYP2C9野生型健康個(gè)體.運(yùn)用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法測(cè)