Poly（A）增強siRNA對外源基因沉默效應的作用及其機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、RNA干擾已經(jīng)成為基因功能研究的強大工具。在本論文中，發(fā)現(xiàn)poly(A)在MCF-7細胞中能夠非特異的增強siRNA對外源基因的沉默效應。以外源報告基因綠色熒光蛋白(EGFP)和紅色熒光蛋白(RFP)為靶標，放棄了通常在siRNA3’端添加UU的設計思路，依靠體外轉(zhuǎn)錄的方法在siRNA反義鏈的3’端加上了單鏈的poly(A)尾巴，制備了siRNA-poly(A)分子，并探索了siRNA-poly(A)與外源基因沉默間的關系，同時對其發(fā)生

2、機制進行了初步研究。研究結(jié)果顯示，siRNA-poly(A)相對于原型siRNA而言具有更強的沉默外源基因的能力，這種增強作用與poly(A)序列和長度密切相關，是一種不依賴于siRNA序列的非特異作用。研究表明，大于50nt的單鏈poly(A)能夠非特異抑制外源基因的表達，提示poly(A)是非特異增強沉默作用的誘發(fā)因素。進一步研究揭示，siRNA-poly(A)在體內(nèi)、體外皆能夠激活雙鏈RNA依賴的蛋白激酶(PKR)和降低外源基因m

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