癌基因Bmi-1的siRNA調(diào)控效應及下游靶基因研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:初步探討癌基因Bmi-1的siRNA調(diào)控效應及下游靶基因。 方法:針對Bmi-1mRNA編碼區(qū)設計3條siRNA,采用體外化學合成Bmi-1siRNA,經(jīng)LipofectamineTM2000脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染具有完整Bmi-1-INK4a基因調(diào)控通路的K562細胞和缺失INK4a基因的A549細胞,熒光顯微鏡觀察檢測轉(zhuǎn)染效率,MTT法檢測Bmi-1siRNA轉(zhuǎn)染后2種細胞的增殖情況,計算有效Bmi-1siRNA作用下2種細

2、胞的IC50,流式細胞儀檢測細胞周期分布,RT-PCR半定量檢測Bmi-1mRNA表達,WesternBlot檢測Bmi-1、P16和hTERT蛋白表達。 結(jié)果:(1)轉(zhuǎn)染6h后,熒光檢測提示2種細胞中轉(zhuǎn)染效率高達85%;(2)在設計的3條siRNA中,僅Bmi-1siRNA1對2種細胞增殖的抑制作用呈較好的濃度依賴性,但無細胞特異性;(3)Bmi-1siRNA1作用于A549和K562細胞的IC50分別為83.69nmol/

3、l和87.69nmol/l;(4)轉(zhuǎn)染Bmi-1siRNA1后K562細胞中G1期比例明顯增加而A549細胞中G1期比例變化不明顯;(5)轉(zhuǎn)染Bmi-1siRNA1后2種細胞倍增時間均顯著延長;(6)轉(zhuǎn)染24h時,A549和K562細胞中Bmi-1mRNA表達明顯減弱,抑制效率分別為53.88%和58.94%;(7)轉(zhuǎn)染48h時,A549和K562細胞中Bmi-1蛋白表達均明顯降低,抑制效率分別達到68.86%和70.24%;(8)Bm

4、i-1siRNA1通過上調(diào)P16蛋白表達抑制K562細胞體外增殖;(9)在A549細胞中Bmi-1siRNA1可下調(diào)hTERT蛋白表達。 結(jié)論:(1)LipofectamineTM2000脂質(zhì)體介導Bmi-1siRNA轉(zhuǎn)染A549和K562細胞具有轉(zhuǎn)染效率高、方法簡便等優(yōu)點;(2)Bmi-1siRNA1能顯著抑制A549和K562細胞體外增殖,但無細胞特異性;(3)Bmi-1siRNA1可有效抑制A549和K562細胞中Bmi

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