siRNA沉默KDR基因對人乳癌細胞甲基化和凋亡作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景與目的:腫瘤的生長和轉移與腫瘤血管生成(Angiogenesis)密切相關。血管內皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)及其受體在腫瘤血管形成中起著關鍵的調節(jié)作用[1-4],能刺激血管內皮細胞分裂、增殖,誘導血管生成,有助于腫瘤的生長和轉移。己發(fā)現的VEGFR有三種:VEGFR1(FLT-1)、VEGFR2(FLK-1、KDR)和FLT-4,VEGFR2在VEGF相關的病理性血管

2、形成中發(fā)揮了重要作用[5]。阻斷KDR表達是一種較好的抗腫瘤治療策略[6]。因此,本課題采用化學修飾的siRNA在體外敲減KDR基因,探討KDR的表達抑制對乳癌細胞抑癌基因甲基化狀態(tài)和凋亡的誘導作用及其機制,為其應用于臨床提供理論和實驗依據。
   方法:體外化學合成針對KDR基因的siRNA序列,在脂質體Lipofectamine2000TM介導下轉染MCF-7細胞,行Hoechst33258染色,熒光顯微鏡下觀察細胞凋亡的形

3、態(tài)學改變;采用RT-PCR檢測caspase-3、survivin、NES1及RUNX3表達水平;甲基化特異性PCR(methylation specificPCR,MSP)技術檢測NES1和RUNX3基因的甲基化情況;比色法檢測caspase-3的活性;利用免疫組織化學方法檢測survivin的表達,并用圖象分析儀分析蛋白表達強度。
   結果:靶向KDR的siRNA轉染MCF-7后誘導細胞凋亡,caspase-3的表達和活性

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