鵝肝臟差異表達基因的分離和鑒定暨茶多酚對朗德鵝肥肝抗氧化性能影響的研究.pdf

1、超飼養(yǎng)(Overfeeding)引起鵝肝臟代謝發(fā)生改變,使得大量脂肪沉積在肝臟中形成肥肝(fatty liver)。不同品種鵝對超飼養(yǎng)導致的肝臟代謝改變的敏感程度不同,所以肥肝性能差異很大。但目前鵝肥肝形成的分子機理仍然不清楚。本研究以朗德鵝和溆浦鵝為試驗材料,利用mRNA差異顯示技術和熒光定量PCR技術,對兩個品種之間、肥肝和普通肝臟之間差異表達基因進行了分離和鑒定,并通過生物信息學方法從蛋白質和核酸兩個水平上進行了結構與功能預測,取

2、得了如下研究結果:
　　 實驗使用了90對差異顯示引物來研究兩個品種鵝肥肝和普通肝臟中mRNA表達水平對超飼養(yǎng)的反應情況,并用熒光定量PCR進行了驗證。6個基因被證實在肥肝和普通肝臟之間差異表達,其中3個基因表達水平被上調,2個基因被下調,1個基因在兩個品種試驗鵝中表現(xiàn)了相反的調控狀態(tài)。
　　 基因8216的表達水平在肥肝中被上調了,并且朗德鵝肝臟(LL和LFL)中的表達水平高于溆浦鵝(XpL和XpFL,)。這個基因的全

3、長cDNA是1797bp,GenBank登陸號:EF488993,經過比對,這個基因的全長cDNA序列與雞硒結合蛋白1(selenium binding protein1,SELENBP1；XM_423397.2)基因有92％的同源性。序列分析發(fā)現(xiàn),這個cDNA序列含有一個1413bp的開放讀碼框(ORF),編碼一個471個氨基酸的蛋白質。這個蛋白質中含有一個56 kDa的硒結合蛋白(SBP56)保守結構域。聚類分析表明,該蛋白質與雞、

4、大鼠、人、猴、狗、牛、小鼠的SBP56蛋白分別具有95％、86％、86％、86％、86％、86％、84％的同源性。組織表達分析顯示,鵝基因8216在肝臟和腎臟中表達豐富,在脾臟中中等表達,在卵巢、子宮、肌胃和腹脂中表達量較低。
　　 基因9105的表達水平在肥肝中被上調了。經過cDNA克隆,得到一個包含全長CDS的1248bp的cDNA片段,GenBank登陸號:EF541127。比對的結果表明,該片段與雞的轉化生長因子β-2

5、mRNA(transforming growth factor beta2,TGFB2；NM001031045.1)有94％的同源性,與其它物種的TGFB2也有很高的同源性。序列分析發(fā)現(xiàn),這個cDNA序列含有一個1239bp的開放讀碼框架(ORF),編碼一個有412個氨基酸的蛋白質。BlastP分析表明,該蛋白質序列存在著2個保守的功能域,一個是引導序列(TGFb前肽),另一個是功能結構域(TGFβ)。聚類分析表明,該蛋白質與雞、非洲爪

6、蛙、大鼠、人、短尾猊、牛、小鼠、豬、綿羊的TGFb2蛋白分別具有99％、96％、87％、90％、91％、89％、88％、90％、89％的同源性。組織表達分析顯示,鵝基因9105在肌胃中表達很豐富,在肝臟、脾臟和卵巢中表達也較豐富,在子宮、肺和肌肉中中等表達,而在腎臟和腹脂中表達量較低。
　　 基因7501的表達水平在肥肝中被上調了,肥肝中(LFL和XpFL,)高于普通肝臟(LL和XpL),朗德鵝(LL和LFL)高于溆浦鵝(XpL

7、和XpFL)。經過cDNA克隆,得到一個1446bp的cDNA片段。經過比對,這個基因的部分cDNA序列與雞的細胞質NADP(+)-依賴型蘋果酸酶1mRNA(malic enzyme1。NADP(+)-dependent,cytosolic,ME1；NM_204303.1)有93％的同源性,與其它物種的ME1也有很高的同源性。組織表達分析顯示,鵝基因7501在肝臟中表達很豐富,在脾臟、卵巢、子宮、肺、腎臟、肌胃和肌肉中中等表達,而在腹脂

8、中表達量最低。
　　 基因8407的表達水平在肥肝中被下調了。經過cDNA克隆,得到一個包含全長CDS的1269bp的cDNA片段,GenBank登陸號:EF541128。比對的結果表明,該片段與雞的細胞質異檸檬酸脫氫酶mRNA(cytosolic NADP-dependent isocitratedehydrogenase,IDH1；XM_421965)有95％的同源性,與其它物種的IDH1也有很高的同源性。序列分析發(fā)現(xiàn),這個

9、cDNA序列含有一個1248bp的開放讀碼框架(ORF),編碼一個有415個氨基酸的蛋白質。BlastP分析表明,該蛋白質序列存在著一個保守的結構域,這個結構域與已知的真核蛋白Icd具有較高的同源性。聚類分析表明,該蛋白質與雞、大鼠、人、猿、牛、小鼠的Icd蛋白分別具有99％、89％、90％、90％、88％、88％的同源性。組織表達分析顯示,鵝基因8407在肝臟中表達豐富,在脾臟、腎臟和肌胃中中等表達,在卵巢、子宮、肺、肌肉和腹脂中表達

10、量較低。
　　 基因9302的表達水平在肥肝中被下調了。經過cDNA克隆,得到一個943bp的cDNA片段。經過比對,這個基因的部分cDNA序列與雞的膽固醇-7α羥化酶基因(Cytochrome P450,family7,subfamily A,polypeptide1,CYP7A1；XM_419217)有93％的同源性。組織表達分析顯示,鵝基因9302在肝臟中表達很豐富,在其它組織中不表達。
　　 基因7102的表達水

11、平在兩種鵝中表現(xiàn)了相反的調控狀態(tài),朗德鵝肥肝中基因7102的表達水平被上調了,而在溆浦鵝肥肝中被下調了。經過cDNA克隆,得到一個923bp的cDNA片段。經過比對,這個基因的部分cDNA序列與雞的NAD依賴型蘋果酸脫氫酶基因(malate dehydrogenase1,NAD(soluble),mRNA,MDH1；NM_001006395.1)有95％的同源性,與其它物種的MDH1基因也有很高的同源性。組織表達分析顯示,鵝基因7102