富硒茶中茶多酚和茶多糖的分離純化及抗氧化性研究.pdf

1、本論文以紫陽富硒茶的老葉為原料，采用超聲波輔助酶提法連續(xù)提取茶多酚和茶多糖，并對茶多酚和茶多糖進(jìn)行了純化。此外對茶多酚進(jìn)行了抗氧化性和抑菌性研究，對茶多糖進(jìn)行了抗氧化性研究和結(jié)構(gòu)的初步分析。
　　1.試驗(yàn)采用超聲波輔助酶法連續(xù)提取茶葉中的茶多酚和茶多糖，以料液比、超聲波功率、果膠酶含量、提取溫度為單因素，通過正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝。結(jié)果表明最佳提取工藝條件為料液比1:35g/mL、超聲波功率250W、果膠酶含量0.4％、提取溫度50

2、℃。在此條件下，茶多酚的得率為30.37%，含量為35.69%；茶多糖的得率為20.12%，含量為27.67%。
　　2.茶多酚和茶多糖的純化。(1)粗茶多酚經(jīng)超濾、大孔樹脂HPD-600、聚酰胺層析柱純化后采用制備型高效液相色譜分離純化出表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、兒茶素沒食子酸酯(ECG)、表沒食子酸兒茶素(EGC)和沒食子兒茶素沒食子酸酯(GCG)四種兒茶素單體。制備色譜條件：色譜柱(10mm×250mm, C18

3、,5.0μm)；流動(dòng)相A:甲醇(0-5min，15%-20%；10-20min，20%；10-15min，20%-25%；15-25min，25%；25-35min，25%-35%；35-45min，35%；45-50min，35%-50%；50-55min，50%-80%；55-60min，80%-15%)；流動(dòng)相B:超純水；檢測波長278nm；進(jìn)樣量3.00g。將所收集的餾分濃縮后重結(jié)晶，冷凍干燥后得到EGCG、ECG、EGC和GC

4、G的粉末，經(jīng)分析型高效液相色譜檢測，各物質(zhì)的純度分別為91.28%、91.56%、90.67%、93.41%。(2)粗茶多糖經(jīng)三氯乙酸脫蛋白后依次經(jīng)超濾、大孔樹脂吸附柱、聚酰胺層析柱、DEAE-52纖維素柱（或分級沉淀）及流水透析進(jìn)一步純化，并比較了DEAE-52纖維素柱洗脫和分級沉淀對多糖純化的效果。結(jié)果表明：經(jīng)DEAE-52纖維素柱洗脫后，所得茶多糖由LPS-1、LPS-2、LPS-3和 LPS-4四種多糖組成，其多糖含量分別為88

5、.63%、86.24%、83.45%、80.89%。經(jīng)分級沉淀后，所得茶多糖由LPS-60、LPS-70、LPS-80、LPS-90四種多糖組成，其多糖含量分別為70.42%、85.86%、81.47%、79.52%。選擇多糖組分LPS-1做后續(xù)的試驗(yàn)。
　　3.采用紫外光譜、紅外光譜、毛細(xì)管電泳、掃描電鏡、原子力顯微鏡、質(zhì)譜對多糖組分LPS-1的結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步研究。結(jié)果表明：UV檢測顯示LPS-1在200nm左右和260-280n

6、m處有明顯的吸收，表明LPS-1是一種糖蛋白；紅外檢測證實(shí)LPS-1具有多糖的特征吸收峰；多糖組分LPS-1由鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖四種單糖組成，且摩爾比為：Rha:Man:Glc:Gal=0.3:2.5:0.9:1.6；掃描電鏡顯示LPS-1呈柱狀，表面光滑；原子力顯微鏡掃描顯示LPS-1分子間排列緊密，呈堆積圈柱狀結(jié)構(gòu)；甲基化碎片質(zhì)譜圖顯示了多糖的特征吸收峰。
　　4.通過測定粗茶多酚、兒茶素單體、粗茶多糖和LPS-1

7、清除DPPH自由基、超氧陰離子自由基和羥基自由基的能力，研究了茶多酚和茶多糖的體外抗氧化性。結(jié)果表明：粗茶多酚和兒茶素單體對DPPH自由基、超氧陰離子自由基和羥基自由基存在很強(qiáng)的清除能力，并且它的清除能力與濃度在一定范圍內(nèi)存在一定的量效關(guān)系。粗茶多酚的清除能力比VC強(qiáng)；兒茶素單體的清除能力是VC的1.22-1.45倍，其中EGCG的清除能力＞GCG的清除能力＞ECG的清除能力＞EGC的清除能力。粗茶多糖和LPS-1對DPPH自由基、超氧