K562細(xì)胞基因表達(dá)譜及基因芯片制備研究.pdf

1、該研究采用限制性顯示PCR技術(shù)(RestrictionDisplay-PCR,RD-PCR),對氯化高鐵血紅素(Hemin)誘導(dǎo)前后K562細(xì)胞的表達(dá)基因進(jìn)行了差異顯示.篩選到差異片段四條,并進(jìn)行了序列測定和同源性比較.研究結(jié)果表明,其中一條基因片段與鳥氨酸脫羧酶抗酶蛋白基因(OAZ)高度同源.進(jìn)一步利用RD-PCR限制性分組的方式,從K562細(xì)胞中大量擴(kuò)增cDNA片段.RD-PCR擴(kuò)增片段被克隆構(gòu)建cDNA片段文庫,經(jīng)分類索引后,將單

2、基因片段純化出來.經(jīng)純化的cDNA片段為基因芯片的制備提供了可靠的原料.采用Cartesian基因芯片打印儀,將純化的cDNA片段打印在玻片載體表面,制作了K562細(xì)胞表達(dá)譜的基因芯片.綜上所述,該研究采用RD-PCR技術(shù),探討了Hemin誘導(dǎo)K562細(xì)胞分化過程中基因的差異表達(dá)和基因表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)OAZ基因在誘導(dǎo)后表達(dá)增加,提示OAZ基因表達(dá)可能與K562細(xì)胞良性分化正相關(guān).進(jìn)一步應(yīng)用RD-PCR技術(shù),探索了利用該技術(shù)快速健忘大量cDN