腦活素、NGF對人類缺氧缺血SVZ的神經保護.pdf

1、目的研究缺氧缺血(hypoxicischemic，m)對妊娠中期人類胚胎腦腦室管膜下區(qū)(subventricularzone，SVZ)神經干細胞(neuralstemcells，NSCs)、神經元、神經膠質細胞(星形膠質細胞、少突膠質祖細胞和小膠質細胞)的影響，比較不同細胞對HI損傷的耐受性差異，揭示缺氧缺血腦損傷(Hypoxic—ischemicbraindamaged，m叻)及其它發(fā)育腦損傷性疾病的多種腦功能障礙表現的細胞學基礎。探

2、討腦活素、NGF對HI損傷的SVZ神經細胞的保護作用，為臨床用藥提供實驗及理論依據。 方法取妊娠17-22孕周(gestationalweeks，gw)的健康胚胎腦5例，即刻解離出SVZ細胞，以氧糖缺失法(oxygen／glUcosedeprivation，OGD)[1]建立H工損傷模型，計算m組和正常組細胞成活率。將HI組和正常組SVZ細胞按A藥(NGF)、B藥(腦活素)兩因素，用藥、不用藥兩個水平，交叉分成4組培養(yǎng)，培養(yǎng)4小

3、時后以細胞特異性標志蛋白nestin、MAP2、GFAP、PDGFRQ及RC120，的抗體通過免疫熒光細胞化學法鑒定SVZ的5種主要細胞：NSCs、神經元、星形膠質細胞、少突膠質祖細胞及小膠質細胞。比較HI組和正常組5種細胞含量的改變，分析兩藥對HI和正常組SVZ細胞總數、對HI組SVZ神經元數的影響。 結果妊娠中期人類胚胎腦SVZ中含有15．08±0．02％的nestin(+)NSCs、48．81±O．03％的MAP2(+)神

4、經元、32．3l±0．03％的GFAP(+)星形膠質細胞、6．92±O．02％的PDGFRQ(+)少突膠質祖細胞和1．15±O．01％的RCA,2,。(+)小膠質細胞。 細胞成活率：HI組為63．41±O．06％，正常組為98．9±O．01％。HI組細胞成活率明顯低于正常組，差異具有顯著性(p<0．001)，提示HI后SVZ細胞損傷明顯。 5種SVZ細胞的百分含量結果比較：nestin(+)的NSCs分別占HI組和正常對

5、照組SVZ細胞的22．47±0．03％、15．08±O．02％，GFAP(+)的星形膠質細胞分別占56．48±0．03％、32．3l±0．03％，RCA120(+)的小膠質細胞分別占3．16±0．01％、1．15±0．01％，HI組中NSCs、星形膠質細胞和小膠質細胞的百分含量明顯高于正常對照組(p

6、的少突膠質祖細胞分別含1．19±0．0l、6．92±O．02％，HI組中神經元、少突膠質祖細胞的含量明顯低于正常對照組(p＜0．001)。提示SVZ中nestin(+)NSCs、GFAP(+)星形膠質細胞、小膠質細胞的抗HI損傷能力強于MAP2(+)神經元、PDGFRQ(十)少突膠質祖細胞。 NGF、腦活素對SVZ神經元、SVZ總細胞的存活數量影響的析因分析結果：對HI組的神經元：NGF、腦活素的主效應、交互作用均具有統(tǒng)計學意義

7、(FSGF=3502．62，p＜O．01；F腦活素=910．67，p＜0．01：F交互=206．45，p＜O．01)。對m組SVZ的總細胞：NGF和腦活素的主效應都有統(tǒng)計學意義(FNGF=11．168，p＜O．01：F腦活素=7．367，p＜O．05)，兩藥交互作用不具有統(tǒng)計學意義(F交互=1．276，p＞O．05)；對正常組SVZ的總細胞：兩藥的主效應、交互作用均無統(tǒng)計學意義(FNGF=1．83，p>0．05；F腦活素=0．44，p>

8、0．05：F交互=0．96，p>0．05)。 結論妊娠中期人類胚胎腦SVZ含有nestin(+)NSCs、MAP2(+)神經元、GFAP(+)星形膠質細胞、PDGFRa(+)少突膠質祖細胞和RCA,2,，(+)小膠質細胞。SVZ細胞對HI損傷敏感，不同SVZ神經細胞對HI損傷的耐受性不同：NSCs、星形膠質細胞對HI損傷的耐受性相對較強；神經元、少突膠質祖細胞對HI耐受性較弱。NGF和腦活素可提高m損傷后存活的SVZ神經元數量和