北京地區(qū)人博卡病毒流行率調(diào)查及表位研究.pdf

1、新發(fā)病毒性傳染病嚴重危害人類的健康,影響社會、經(jīng)濟穩(wěn)定,甚至威脅國家安全,引起全球高度關(guān)注。人博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)是2005年被發(fā)現(xiàn)的一種新病毒,可能與呼吸道感染有關(guān)。目前,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了4種HBoV(HBoV1—4),但其致病性均尚未闡明。現(xiàn)有關(guān)于HBoV的流行情況研究大多集中于HBoV1和HBoV2,關(guān)于HBoV3和HBoV4的報道很少,且4種HBoV在人群中的流行水平尚不清楚。此外,由于HBoV之間具有

2、較高的氨基酸同源性,它們之間的血清學交叉反應(yīng)尚不清楚,給HBoV的免疫學檢測方法研究和評價帶來困難。為此,本研究對北京地區(qū)急性呼吸道感染兒童中4種HBoV的流行率和健康人群中HBoV1、2、3的血清抗體流行率進行了研究,并對HBoV的主要抗原VP2蛋白的表位進行了篩選。主要結(jié)果如下:
　　 一、北京地區(qū)人博卡病毒分子流行率調(diào)查
　　 在2008年3月至2010年7月間收集在北京兒童醫(yī)院住院的患急性下呼吸道感染的患兒鼻咽洗

3、液標本1238份,進行HBoV通用PCR檢測。結(jié)果顯示:HBoV總檢出率為11.4％,其中HBoV1檢出率為10.6％,HBoV2為0.4％,HBoV3為0.4％。無HBoV4檢出。HBoV感染主要集中于5歲以下兒童,占HBoV陽性病例數(shù)的93.6％。與以往報道類似,與其它呼吸道病毒的共檢出率可達85.1％。HBoV檢出沒有明顯的季節(jié)差異。此外,2006年3月-2007年11月從北京兒童醫(yī)院門診收集患急性胃腸炎的366份兒童腹瀉糞便標本

4、,進行HBoV PCR檢測。結(jié)果顯示:HBoV總檢出率為12％,陽性病例年齡分布為2個月至24個月(中位數(shù)為9個月)。其中HBoV1檢出率為2.5％,HBoV2為9.0％,HBoV3為0.5％,無HBoV4檢出。HBoV與其它病毒共檢出率為79.5％。進化樹分析和重組分析結(jié)果顯示,HBoV3可能來源于HBoV1和HBoV2的基因重組,重組位點位于NS1基因的上游和VP1/2讀碼框中；HBoV3也可能源于HBoV1和HBo4的基因重組。本

5、研究首次在呼吸道樣本中檢出HBoV3,為評估HBoV3的流行傳播特征和致病性提供了基礎(chǔ)性數(shù)據(jù)。
　　 二、北京地區(qū)健康人群中人博卡病毒的血清流行率調(diào)查
　　 利用桿狀病毒系統(tǒng)表達了HBoV1、2、3的病毒樣顆粒,采用CsCl密度梯度離心純化后,經(jīng)電子顯微鏡和Western blot方法進行了鑒定。利用HBoV1、2、3的病毒樣顆粒,建立了HBoV1、2、3 IgG抗體ELISA檢測方法。在此基礎(chǔ)上對642份北京地區(qū)健康人

6、群的不同年齡組血清樣本中HBoV1、2、3 IgG抗體的流行情況進行了檢測,結(jié)果顯示:人群中普遍感染HBoV1,在0.5—5歲的兒童,HBoV1抗體的陽性率大于HBoV2和HBoV3。HBoV的陽性率隨年齡的增加而增高,20歲以后的成人HBoV1、2、3抗體陽性率均達到100％。雖然HBoV1、2、3抗體滴度隨年齡的增加而增高,但HBoV2和HBoV3抗體滴度與HBoV1相比一直處于較低水平。這些結(jié)果提示不同型的HBoV流行水平存在差異

7、,HBoV1是主要的HBoV的流行型。此外,建立了HBoV1 IgM抗體ELISA檢測方法,具有良好的靈敏度、特異度及診斷符合率,可以用于HBoV1早期感染的血清學檢測。
　　 三、人博卡病毒VP2表位的篩選
　　 制備HBoV1、2、3的VP2蛋白的鼠抗血清,和HBoV1、2、3的病毒樣顆粒分別進行Western blot和ELISA檢測,結(jié)果表明HBoV1、2、3之間存在血清學交叉反應(yīng)。為了鑒定用于HBoV1、2、3

8、血清學檢測的特異性抗原,利用噬菌體載體構(gòu)建了人博卡病毒VP2噬菌體肽庫。分別用抗HBoV1、2、3的VP2蛋白的鼠抗血清和HBoV感染陽性的人血清對噬菌體肽庫進行了生物淘洗,并使用ELISA方法篩選陽性肽,通過對陽性肽的基因測序及分析,初步獲得了2個可能含有HBoV1、
　　 2、3的共有表位和1個HBoV3的特異性表位的區(qū)域。
　　 綜上所述,本研究首次發(fā)現(xiàn)了HBoV3核酸在急性呼吸道感染樣本中的存在；通過血清流行病學