HLA-DRB1,-DQB1基因多態(tài)性與家族性無癥狀性中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病易感性的研究.pdf

1、目的：
　　中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system,CNS）脫髓鞘病是一組以神經(jīng)髓鞘脫失為主，神經(jīng)元胞體及其軸索相對完好為特征的自身免疫性疾病，病因復雜，病種繁多，臨床表現(xiàn)多樣。在大多數(shù)神經(jīng)纖維表面都有一層起到保護作用的神經(jīng)纖維，幫助傳導神經(jīng)沖動，同時具備絕緣作用的結構，稱為髓鞘。神經(jīng)髓鞘可因各種原因變性、壞死，從而引起相應神經(jīng)功能的缺損，導致病患出現(xiàn)各種臨床病癥，稱之為脫髓鞘病。在CNS脫髓鞘病的研究中，以多

2、發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)為最多。在 MS的遺傳學研究中，HLA基因與家族的相關性確定了MS發(fā)病具有遺傳傾向，這可能會在一定程度上解釋 MS患者家族中的發(fā)病率高的現(xiàn)象。目前雖已明確HLA基因是MS發(fā)生最重要的遺傳因素[1]，但因種族、地區(qū)等因素，所得結論并不完全一致，甚至有時結果截然相反。HLA基因與機體免疫應答過程密切關聯(lián)，主要作用是呈遞抗原和限制免疫細胞之間的相互作用（即HLA限制性）。已有研究證實，HL

3、A-Ⅱ類基因相關性疾病，尤其是與 HLA-DRB1基因強關聯(lián)的疾病，可導致免疫調(diào)節(jié)等方面的障礙，表現(xiàn)出慢性病程、炎性、免疫功能障礙及一定的遺傳傾向[2]。迄今為止，國內(nèi)外關于中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病易感基因的家族聚集性研究少見報道。為此，本研究采用 PCR-SSP方法研究河北承德地區(qū)2家系13例家族性無癥狀性中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病患者HLA-DRB1，-DQB1等位基因的多態(tài)性與患病易感性的關系。
　　方法：
　　1、研究對象：<

4、br>　　1.1、病例組13例，為2007.9-2012.11河北省承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科收治的2個家系的家族性無癥狀性中樞神經(jīng)脫髓鞘病的患者。本研究在河北省承德地區(qū)所追蹤到2家系50人中共13人出現(xiàn)相似的患病癥狀及影像學表現(xiàn)，多為中年亞急性、慢性起病，無明顯前驅感染史，多數(shù)患者除偶發(fā)頭暈、頭痛，記憶力較前減退等輕度表現(xiàn)外無其他的明顯臨床癥狀，即臨床表現(xiàn)、體征不典型，影像學檢查（見附圖 Fig.3,4,5）中雙側側腦室周圍、雙側額顳

5、頂葉白質內(nèi)可見多發(fā)點狀或斑片狀異常信號，呈脫髓鞘表現(xiàn)，綜合診斷為CNS脫髓鞘病。自2007年發(fā)現(xiàn)2家系病患以來，多數(shù)患者病情較發(fā)病時無明顯進展。經(jīng)檢查排除腦血管病、腦白質營養(yǎng)不良、經(jīng)典 MS（不符合2010年McDonald[3]的MS診斷標準）、影像學臨床孤立綜合征（RIS）等的可能性，無其他疾病家族遺傳史，故暫定義為家族性無癥狀性CNS脫髓鞘病。病例組中男性7例，女性6例，年齡37-56歲，平均49歲。
　　1.2、對照組33

6、例，近期均無感染史、無結核病史，研究開始前經(jīng)體檢均除外CNS疾病、家族遺傳性疾病及其他自身免疫性疾病。依照與病例組年齡、性別構成相近的原則進行系統(tǒng)隨機抽樣。兩組研究對象均為漢族人，經(jīng)分析，年齡、性別構成差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。該研究通過倫理委員會同意，全部受試者知情并同意。
　　2、研究方法：
　　2.1、臨床資料的收集整理及分析：匯集整理2家族13例家族性無癥狀性中樞神經(jīng)脫髓鞘疾病患者的起病誘因、起病形式、首發(fā)癥

7、狀、受累部位等臨床表現(xiàn)，以及MRI等影像學資料。
　　2.2、樣本采集:所有受試者過夜禁食12～14小時于次日清晨肘部靜脈采血，EDTA抗凝，將血漿標本離心后收集白細胞膜層凍存于-20℃冰箱內(nèi)。采用序列特異性引物-聚合酶鏈反應法（PCR-SSP）對受試者血漿中HLA-DRB1、-DQB1等位基因型別進行測定。
　　2.3、繪制系譜圖：通過追蹤調(diào)查、資料分析及基因檢測，繪制2家系的系譜圖，進一步解釋此類疾病是否存在遺傳傾向，找

8、到可能的易感基因。
　　3、統(tǒng)計學分析：
　　應用 SPSS17.0統(tǒng)計軟件對病例組與健康對照組的HLA-DRB1，-DQB1等位基因分布頻率（gene frequency）進行四格表卡方檢驗，或連續(xù)校正檢驗（20％以上的理論值1＜T＜5，N＞40）分析，P<0.05具有顯著性。
　　結果：
　　1、 HLA-DRB1、-DQB1基因多態(tài)性的判斷
　　1.1、通過對2家系13例患者與33例健康對照進行HLA

9、-DRB1，-DQB1基因SSP分型，共檢出12個型別的HLA-DRB1等位基因（分別是HLA-DRB1*01、*03、*04、*07、*08、*09、*10、*11、*12、*13、*14、*15等位基因）；5個型別 HLA-DQB1等位基因（分別是HLA-DQB1*02、*03、*04、*05、*06等位基因）。其中病例組包含6個型別的HLA-DRB1等位基因（分別是 HLA-DRB1*07、*08、*09、*11、*14、*15等

10、位基因）；4個型別 HLA-DQB1等位基因（分別是HLA-DQB1*02、*03、*05、*06等位基因）（見附表Table1 and2）。
　　1.2、每個家系中的樣本HLA-DRB1、-DRB1等位基因檢測結果均符合基因的分離、組合定律（見附圖Fig.1 and2）。每個樣本HLA-DRB1、-DRB1等位基因均符合HLA-DR與HLA-DQ的之間關聯(lián)關系（見附圖Fig.11）。
　　2、 HLA-DRB1、-DQB1

11、基因多態(tài)性與家族性無癥狀性中樞神經(jīng)脫髓鞘病的關系分析（見附表Table1 and2）
　　2.1、 HLA-DRB1*14在病例組與健康對照組中的基因頻率分別為38.46%和9.10%,差別有顯著意義(χ2=11.715，P=0.001<0.05)。
　　2.2、其他等位基因兩組間差別無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結論：
　　1、脫髓鞘病多亞急性或慢性起病，無明顯誘因，是環(huán)境因素與遺傳因素共同作用的結果，M

12、RI檢查大腦白質常有異常信號，有助于脫髓鞘病的早期診斷。
　　2、 HLA-DRB1*14基因可能是造成承德地區(qū)這兩個家系罹患脫髓鞘病的易感基因，在某些程度上可能賦予此類疾病一定的遺傳傾向，支持多數(shù)學者提出的遺傳因素和環(huán)境因素共同導致脫髓鞘疾病的觀點。但 HLA-DRB1*14基因是否是造成這兩個家系脫髓鞘病特殊臨床特點的關鍵基因還有待進一步深入研究。
　　3、本研究未發(fā)現(xiàn)承德地區(qū)家族性無癥狀性中樞神經(jīng)脫髓鞘病與HLA-DR