西安地區(qū)出土3000年前人釉原蛋白基因的分析.pdf

1、隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)的不斷發(fā)展及實(shí)驗(yàn)技術(shù)的不斷進(jìn)步，古DNA研究已經(jīng)廣泛應(yīng)用于考古學(xué)、人類學(xué)、生物學(xué)及遺傳學(xué)等諸多領(lǐng)域，為考古發(fā)掘出的古代人物的身份鑒定、人類的演化遷徙、生物的起源進(jìn)化及疾病的遺傳流行等提供了分子生物學(xué)上的證據(jù)。
　　在釉質(zhì)發(fā)生的早期階段，釉質(zhì)中的蛋白質(zhì)含量高達(dá)20％～30％。其中，釉原蛋白是釉質(zhì)發(fā)育過(guò)程中最為豐富的蛋白成分，在釉質(zhì)礦化的第一階段占釉基質(zhì)的60％～90％。在釉質(zhì)的形成過(guò)程中，釉原蛋白作為最主要的細(xì)胞外

2、基質(zhì)蛋白可能在釉質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)模式形成和演化過(guò)程中扮演了重要的角色。釉原蛋白基因在不同種屬中均有表達(dá)，被看做種系發(fā)生分化的一個(gè)重要標(biāo)志物。人類釉原蛋白基因是分別位于X和Y染色體上的一對(duì)等位基因，其在兩條性染色體上的不同表達(dá)成為性別鑒定的重要方法。
　　本課題建立了一種利用古人類牙齒提取基因組DNA的簡(jiǎn)便方法，從西安地區(qū)出土3000年前人牙齒中提取出基因組DNA，設(shè)計(jì)釉原蛋白基因特異性引物，采用PCR技術(shù)對(duì)所選樣本進(jìn)行了性別鑒定，同時(shí)對(duì)

3、西安地區(qū)出土3000年前人釉原蛋白基因高可變區(qū)變異位點(diǎn)進(jìn)行了篩查，并比較了西安地區(qū)出土3000年前人與現(xiàn)代西安人釉原蛋白基因相應(yīng)SNP位點(diǎn)不同基因型的出現(xiàn)頻率。
　　本課題的主要研究結(jié)果如下：
　　1.“逆向根管技術(shù)”和Chelex-100提取法相結(jié)合的方法可成功從3000年前人牙齒中提取出基因組DNA，提取過(guò)程中不僅較大程度的保證了實(shí)驗(yàn)用牙的形態(tài)完整性，同時(shí)所提取到的基因組DNA分子含量較高，可用于PCR擴(kuò)增技術(shù)相關(guān)的基因

4、研究。
　　2.設(shè)計(jì)釉原蛋白基因特異性引物對(duì)30例3000年前人DNA樣品擴(kuò)增后得出準(zhǔn)確的性別鑒定結(jié)果，完善了樣本信息，為后續(xù)研究提供了便利條件。
　　3.對(duì)西安地區(qū)出土3000年前人釉原蛋白基因高可變區(qū)擴(kuò)增后測(cè)序分析，與NCBI公布的人類釉原蛋白基因序列比對(duì)后未發(fā)現(xiàn)任何變異，得出與進(jìn)化分析相左的結(jié)果。
　　4.對(duì)西安地區(qū)出土3000年前人與現(xiàn)代西安人釉原蛋白基因SNP位點(diǎn)rs6639060和rs2106416不同基因