沙眼衣原體培養(yǎng)陽性率提高及臨床株熱休克蛋白60的轉(zhuǎn)錄隨傳代的變化.pdf

1、沙眼衣原體(Chlamydiatrachomatis，Ct)感染是目前發(fā)達(dá)最常見的性病病原體，可引起尿道炎、宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、附睪炎、前列腺炎、不孕癥多種疾病，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢，已經(jīng)成為一個危害極大的公共健康問題。沙眼衣原體檢測的金標(biāo)準(zhǔn)目前仍然是細(xì)胞培養(yǎng)。但是細(xì)胞培養(yǎng)并未在臨床工作中廣泛采用。而且，臨床株的培養(yǎng)是體外藥物敏感試驗(yàn)的基礎(chǔ)。因此，提高沙眼衣原體細(xì)胞培養(yǎng)檢出的陽性率顯得尤為重要。另外，導(dǎo)致沙眼衣原體感染治療失敗的一個重

2、要原因是沙眼衣原體的持續(xù)感染，持續(xù)感染時碘染不能看到典型的包涵體且沙眼衣原體熱休克蛋白60含量增加。
　　目的：1、探討聚乙二醇(PEG)促進(jìn)沙眼衣原體D-UW-5/Cx型、E-UW-5/Cx型標(biāo)準(zhǔn)株生長的最適濃度及聚乙二醇對沙眼衣原體D-UW-5/Cx型、E-UW-5/Cx型標(biāo)準(zhǔn)株4種常用抗菌藥物阿奇霉素、米諾環(huán)素、莫西沙星、多西環(huán)素體外藥物敏感性和31例臨床標(biāo)本包涵體數(shù)量的影響。
　　2、探討E型標(biāo)準(zhǔn)株和40例經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)

3、成功的沙眼衣原體E型臨床株隨著傳代次數(shù)的增加其熱休克蛋白60(HSP60)含量的改變及不同治療效果患者首次傳代碘染出現(xiàn)包涵體情況的差別。
　　方法：在沙眼衣原體D、E型菌株接種于致密單層的McCoy細(xì)胞時，加入含有不同濃度PEG的細(xì)胞培養(yǎng)液，離心后在孵箱中靜置2h后換成衣原體感染液，48h后固定，碘染計(jì)數(shù)包涵體數(shù)量。將經(jīng)過0.7％PEG處理過的沙眼衣原體接種于細(xì)胞培養(yǎng)板的McCoy細(xì)胞，使McCoy細(xì)胞感染率達(dá)90％以上后進(jìn)行藥敏

4、實(shí)驗(yàn)。采用微量稀釋法測定體外4種抗菌藥物對沙眼衣原體的作用并在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入0.7％PEG，將31例衣原體細(xì)胞培養(yǎng)陽性且基因分型為D、E型的臨床標(biāo)本加入或者不加入0.7％PEG接種于致密單層的McCoy細(xì)胞后計(jì)數(shù)第一代全孔包涵體數(shù)量。
　　將經(jīng)McCoy細(xì)胞培養(yǎng)法檢測出的40例E型沙眼衣原體臨床株，通過RT-PCR方法檢測首次傳代，二次傳代，三次傳代和四次傳代的CHSP60含量，將40例E型沙眼衣原體臨床株分為首次傳代出現(xiàn)和未出

5、現(xiàn)包涵體兩組，通過x2檢驗(yàn)不同治療效果患者首次傳代碘染出現(xiàn)包涵體情況的差別。
　　結(jié)果：0.7％PEG能使沙眼衣原體E型標(biāo)準(zhǔn)株包涵體數(shù)量提高3.44倍，D型標(biāo)準(zhǔn)株包涵體數(shù)量提高3.56倍，為促進(jìn)沙眼衣原體D、E型生長的最適濃度。在體外，PEG處理過的沙眼衣原體D、E型標(biāo)準(zhǔn)株的阿奇霉素、莫西沙星、多西環(huán)素、米諾環(huán)素的最低抑菌濃度與未經(jīng)PEG處理的沙眼衣原體標(biāo)準(zhǔn)株藥敏結(jié)果一致，0.7％PEG可以顯著增加沙眼衣原體D、E型臨床標(biāo)本傳代產(chǎn)

6、生的包涵體數(shù)量。經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)成功的E型沙眼衣原體臨床株傳代未出現(xiàn)包涵體時其CHSP60含量較出現(xiàn)包涵體時高(P<0.05)。首次傳代出現(xiàn)包涵體與否其對應(yīng)患者治療效果有差別，治療失敗患者80％首次傳代未出現(xiàn)包涵體，一個療程治療后轉(zhuǎn)陰患者70％在首次傳代出現(xiàn)包涵體。
　　結(jié)論：1、0.7％的PEG可以顯著促進(jìn)沙眼衣原體D型、E型的生長并對沙眼衣原體D型、E型標(biāo)準(zhǔn)株藥敏結(jié)果無明顯影響，且可以進(jìn)一步提高臨床標(biāo)本檢測的敏感性。
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