大鼠頜下腺細胞與透明質酸修飾的絲素-殼聚糖支架體外復合培養(yǎng)的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 研究透明質酸修飾的絲素-殼聚糖(Silkfibmin-Chitosan/Hyaluronicacid,SF-CS/HA)支架對大鼠頜下腺細胞(Rat submandibular gland cells,RSMG-cells)黏附、增殖及分泌的影響。
　　 方法：
　　 使用凍干法制備殼聚糖(Chitosan,CS)支架、絲素-殼聚糖(Silkfibroin-Chitosan,SF-CS)支架以及透明

2、質酸修飾的絲素-殼聚糖(Silkfibroin-Chitosan/Hyaluronicacid,SF-CS/HA)支架。組織塊法原代培養(yǎng)3d齡的大鼠頜下腺細胞,將純化的大鼠頜下腺細胞分別與CS支架、SF-CS支架、和SF-CS/HA支架共同培養(yǎng),免疫組化鑒定細胞來源,采用掃描電鏡、Hoechst染色熒光顯微鏡下觀察頜下腺細胞與支架的附著情況,檢測各組中細胞上清液中唾液淀粉酶含量的差異,應用MTT法對比三種支架對細胞增殖的影響。所得實驗數

3、據應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行處理,計量資料用(-x±s)表示,組間差異比較采用單因素方差分析,以α=0.05,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 掃描電鏡觀察SF/CS-HA支架:支架為多孔三維結構,孔隙大小在100-200μm之間。第7天時可見頜下腺細胞伸展在SF/CS-HA支架中的網狀結構內,黏附的細胞伸出足突,細胞間有微絨毛相聯(lián)系,細胞表面有許多分泌顆粒和絲狀纖維。大鼠頜下腺細胞與SF-CS

4、/HA支架復合培養(yǎng)1h后開始附著于支架上,4h附著率達70%,8h達90%以上,24h時有95%左右的頜下腺細胞粘附。而在SF-CS組和CS組,黏附率在各個時間段上與SF-CS/HA組差異明顯,黏附速率要顯著慢于SF-CS/HA組。Hoechst熒光染色觀察到相對于SF-CS組和CS組,細胞在SF-CS/HA組中不僅黏附數量要多于SF-CS組和CS組,并且細胞間聯(lián)系和細胞活力更加良好。通過MTT法檢測發(fā)現(xiàn)大鼠頜下腺細胞與SF-CS/HA

5、支架復合培養(yǎng)5d、7d后增殖迅速,而11d、13d和15d細胞幾乎沒有增殖。SF-CS/HA組的細胞在7d、9d和10d增殖速度要比SF-CS和CS組更為顯著(p＜0.01,n=3)。細胞培養(yǎng)上清液中的淀粉酶分泌量隨著培養(yǎng)時間有不同程度的增加,SF-CS/HA組在3d、5d、7d、9d唾液淀粉酶濃度與SF-CS組和SF組相比有明顯差異(p＜0.001,n=3)。
　　 結論：
　　 與CS支架、SF-CS支架相比,大鼠頜