大鼠頜下腺細(xì)胞與含IGF-I的絲素——?dú)ぞ厶侵Ъ荏w外復(fù)合培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 探討含有胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-I)的絲素-殼聚糖支架(Silk fibroin-chitosanscaffold)對(duì)大鼠頜下腺細(xì)胞(Rat submandibular gland cells RSGCs)粘附、增殖、分泌作用的影響，為進(jìn)一步構(gòu)建功能性的頜下腺組織提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 體外組織塊法原代培養(yǎng)1-3天齡Wistar大鼠的頜下腺細(xì)胞，免疫組織化學(xué)法鑒定、胰酶消化法和差速貼壁

2、法純化、傳代擴(kuò)增。
　　 采用凍干技術(shù)制作含有IGF-I的絲素-殼聚糖支架用作實(shí)驗(yàn)組，不含IGF-I的絲素-殼聚糖支架用作對(duì)照組。支架的規(guī)格統(tǒng)一為5mm×5mm×5mm，其中用作實(shí)驗(yàn)組的每個(gè)支架含IGF-I濃度為10ng/ml。
　　 將濃度為5.0×106/ml的第二代大鼠頜下腺細(xì)胞懸濁液接種于含有IGF-I的絲素-殼聚糖支架為實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行培養(yǎng)；將濃度為5.0×106/ml的第二代大鼠頜下腺細(xì)胞懸濁液接種子不含IGF-I

3、的絲素-殼聚糖支架為對(duì)照組進(jìn)行培養(yǎng)。
　　 于接種后的2h、4h、8h、12h、24h測(cè)定實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的大鼠頜下腺細(xì)胞的粘附率，免疫熒光觀察細(xì)胞在支架上的粘附情況。MTT法檢測(cè)接種后1d、3d、5d、7d、9d實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的大鼠頜下腺細(xì)胞增殖情況。掃描電鏡觀察接種后1d、3d、5d大鼠頜下腺細(xì)胞在支架上生長(zhǎng)的超微結(jié)構(gòu)。測(cè)定1d-9d培養(yǎng)復(fù)合物上清液中淀粉酶含量，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的大鼠頜下腺細(xì)胞分泌功能。采用SPSS for

4、windows13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、成功將純化擴(kuò)增的大鼠頜下腺細(xì)胞與含IGF-I的絲素-殼聚糖支架和不含IGF-I的絲素-殼聚糖支架復(fù)合培養(yǎng)。
　　 2、細(xì)胞粘附率檢測(cè)：實(shí)驗(yàn)組粘附率高于對(duì)照組，2h、24h時(shí)P＞0.05;4h、8h、12h時(shí)P＜0.05。
　　 3、免疫熒光檢測(cè)：Hoechst染色觀察，RSGCs

5、與支架復(fù)合培養(yǎng)2h，實(shí)驗(yàn)組支架上可見細(xì)胞藍(lán)色熒光，對(duì)照組偶見；24h時(shí)兩組支架上布滿藍(lán)色細(xì)胞熒光，實(shí)驗(yàn)組略多于對(duì)照組。
　　 4、細(xì)胞增殖結(jié)果顯示（MTT法）：接種后1d，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)量略大于對(duì)照組（P＞0.05），而3d-9d，兩組支架上的細(xì)胞數(shù)量有顯著性差異(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組優(yōu)于對(duì)照組。
　　 5、細(xì)胞上清液中淀粉酶含量檢測(cè)：兩組大鼠頜下腺細(xì)胞上清液的淀粉酶分泌量均有不同程度的增加，從3d-9d實(shí)驗(yàn)組優(yōu)于對(duì)照組

6、，淀粉酶含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 6、掃描電子顯微鏡觀察：絲素-殼聚糖支架呈海綿狀結(jié)構(gòu)，植入初期大鼠頜下腺細(xì)胞成圓形，散在的粘附于絲素-殼聚糖支架網(wǎng)孔內(nèi)，實(shí)驗(yàn)組突起較少，對(duì)照組幾乎沒有突起；隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組大鼠頜下腺細(xì)胞呈多角形、帶有多個(gè)突起，細(xì)胞表面凹凸不平，對(duì)照組突起和細(xì)胞表面凸凹不平?jīng)]有實(shí)驗(yàn)組明顯。
　　 結(jié)論:
　　 含IGF-I的絲素-殼聚糖支架對(duì)大鼠的頜下腺細(xì)胞的粘附、增殖、