ECV304細胞用于體外血管新生的實驗研究.pdf

1、第一部分:ECV304細胞體外二維培養(yǎng)形成管狀結構的觀察.目的:觀察ECV304細胞體外二維培養(yǎng)能否形成管狀結構.方法:我們把自然轉化的人臍靜脈內皮細胞—ECV304細胞株引入實驗,不用額外的生長因子,不涂布基質,選擇低血清濃度、低細胞種植密度或常規(guī)長期培養(yǎng)等條件進行二維培養(yǎng).結果:在多種條件下,二維培養(yǎng)的ECV304細胞都能形成管狀結構,結論:提示ECV304細胞可能是研究體外血管新生良好的內皮工具.第二部分:體外血管新生三維模型的構

2、建.目的:以ECV304細胞為內皮工具,構建體外血管新生的三維模型.方法:以自制的鼠尾膠原制成的凝膠作為細胞外基質,在凝膠上面種植ECV304細胞,長滿單層后用含堿性成纖維細胞生長因子(b-FGF)的培養(yǎng)液刺激,用倒置相差顯微鏡觀察ECV304細胞入侵凝膠的情況.結論:自制的鼠尾膠原凝膠可以為內皮細胞提供良好的細胞外基質微環(huán)境,再加上必要的生理、病理信號刺激,將能夠誘導ECV304細胞表現出血管新生中的遷移、增殖、發(fā)芽等步驟.ECV30

3、4細胞三維凝膠模型可用來研究血管新生.第三部分:心肌成纖維細胞誘導體外血管新生作用初探.目的:探討心肌成纖維細胞在血管新生中的作用.方法:分離培養(yǎng)乳鼠心肌成纖維細胞(CF)并收集其條件培養(yǎng)液(CF-CM),用其作為ECV304細胞的培養(yǎng)液,<'3>H-TdR摻入法檢測CF-CM對ECV304細胞增殖活性的影響,并采用體外三維模型檢測其是否能誘導ECV304向膠內入侵、發(fā)芽.結論:心肌成纖維細胞條件培養(yǎng)液有促進ECV304細胞增殖和遷移的