蛋白質(zhì)硝化及抑制評(píng)價(jià)體系的建立.pdf

1、過(guò)氧亞硝酸(ONOO-)是細(xì)胞內(nèi)一種重要的活性氧物種，在體內(nèi)一旦生成，就會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA等生物大分子造成氧化損傷。其中，蛋白質(zhì)硝基化是過(guò)氧亞硝酸在體內(nèi)損傷的主要途徑，其產(chǎn)物3-硝基酪氨酸(3-NT)是目前公認(rèn)的體內(nèi)損傷標(biāo)志物，在多種病變組織中都檢測(cè)到了它的存在。所以建立蛋白質(zhì)硝化及抑制評(píng)價(jià)體系具有重要的研究意義。
　　 本文以牛血清白蛋白為硝化底物、過(guò)氧亞硝酸為硝化試劑，以褪黑素為硝化抑制劑建立了蛋白質(zhì)硝化及抑制評(píng)價(jià)體系

2、。在此基礎(chǔ)上，選用多酚類化合物蘆丁和原花青素作為硝化抑制劑對(duì)體系進(jìn)行了驗(yàn)證。最后，以SD糖尿病大鼠為動(dòng)物模型，探討了褪黑素對(duì)糖尿病的防治及對(duì)腎臟的保護(hù)作用。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在37℃、pH7.2的PBS介質(zhì)中反應(yīng)90min，且牛血清白蛋白與過(guò)氧亞硝酸的濃度比為1:18時(shí)，硝基化反應(yīng)進(jìn)行的比較完全。在該實(shí)驗(yàn)條件下，在反應(yīng)體系中引入褪黑素、蘆丁和原花青素。結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種抗氧化劑都能一定程度地抑制硝基化反應(yīng)，同濃度下，抑制能力依次為

3、：褪黑素＞原花青素＞蘆丁，最大抑制率分別為：80.7％，66.9[％]，38.7[％]。初步的抑制機(jī)理研究表明，三種抗氧化劑抑制硝化反應(yīng)的機(jī)理是清除自由基而非還原硝化產(chǎn)物。
　　 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，造模成功后，糖尿病大鼠的腎臟出現(xiàn)損傷。經(jīng)過(guò)褪黑素治療后，臟器系數(shù)降低，糖尿病癥狀有所減輕。在組織和血清中，干預(yù)組(DM＋M)大鼠的NO2-+NO3-含量和MDA含量均明顯低于糖尿病組(DM)，說(shuō)明褪黑素能抑制糖尿病的氧化應(yīng)激反應(yīng)，有緩