乳腺癌人源骨轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中TGFA基因表達(dá)的作用及意義.pdf

1、【目的】
　　 研究乳腺癌細(xì)胞在骨轉(zhuǎn)移前后基因表達(dá)譜的改變，探究表達(dá)差異基因在乳腺癌特異性骨轉(zhuǎn)移中的作用。
　　 【方法】
　　 ①建立乳腺癌人源骨轉(zhuǎn)移NOD/SCID小鼠模型。
　　 ②分離培養(yǎng)并利用染色體技術(shù)鑒定骨轉(zhuǎn)移細(xì)胞株。
　　 ③使用cDNA微陣列技術(shù)及RT-qPCR技術(shù)篩選差異表達(dá)基因。
　　 ④利用siRNA技術(shù)進(jìn)行對(duì)差異基因的表達(dá)進(jìn)行干擾。
　　 ⑤應(yīng)用RT-qPC

2、R技術(shù)和蛋白質(zhì)印記技術(shù)檢測干擾前后差異基因表達(dá)改變情況，以及使用Transwell技術(shù)檢測腫瘤細(xì)胞侵襲能力和體外成瘤能力等生物學(xué)形狀的變化。
　　 ⑥使用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 【結(jié)果】
　　 ①人源移植骨的腫瘤形成概率高于同源移植骨腫瘤的形成率（50％vs28％，P<0.05）。
　　 ②人源骨轉(zhuǎn)移細(xì)胞株相對(duì)于腫瘤母系發(fā)生染色體眾數(shù)的改變（n=68vs

3、n=66）。
　　 ③經(jīng)過cDNA微陣列的篩選，發(fā)現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移細(xì)胞株有3474個(gè)上調(diào)表達(dá)位點(diǎn)，及2894個(gè)下調(diào)表達(dá)位點(diǎn)。經(jīng)相關(guān)文獻(xiàn)及RT-qPCR驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)TGFA基因是一個(gè)可能對(duì)骨轉(zhuǎn)移產(chǎn)生重要影響的基因。
　　 ④對(duì)骨轉(zhuǎn)移細(xì)胞進(jìn)行siRNA干擾并建立轉(zhuǎn)移株siTGFA細(xì)胞，轉(zhuǎn)移株siTGFA細(xì)胞中TGFA基因的轉(zhuǎn)錄（0.277±0.031）及表達(dá)（0.078±0.005）水平相對(duì)于未干擾細(xì)胞發(fā)生了顯著下降（P<0.05）；

4、其體外侵襲能力也發(fā)生顯著下降（P<0.05）；在體外成瘤實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)移株成瘤率（80％）顯著高于腫瘤母系（40％，P腫瘤母系vs轉(zhuǎn)移株細(xì)胞<0.05），而轉(zhuǎn)移株siTGFA細(xì)胞成瘤率（20％）顯著低于轉(zhuǎn)移株（P轉(zhuǎn)移株siTGFA細(xì)胞vs轉(zhuǎn)移株細(xì)胞<0.05）。
　　 【結(jié)論】
　　 ①利用人源移植骨建立的乳腺癌NOD/SCID小鼠模型比傳統(tǒng)模型更適合研究乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的末端親和機(jī)制。
　　 ②乳腺癌發(fā)生人源移植骨轉(zhuǎn)移