環(huán)氧化酶-2遺傳變異和吸煙交互作用與胰腺癌—核仁磷酸蛋白的作用.pdf

1、目的：COX—2與胰腺癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，本研究探討COX—2基因啟動(dòng)子區(qū)遺傳變異與胰腺癌遺傳易感性的關(guān)系及其在吸煙與胰腺癌發(fā)病中的作用。 方法：研究對(duì)象為393例胰腺癌患者和786例健康對(duì)照。COX—2啟動(dòng)子區(qū)—765G/C、—1195G/A和—1290A/G基因型用PCR—限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)方法測(cè)定，以多因素logistic回歸分析基因型及吸煙等危險(xiǎn)因素與胰腺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系：用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)研究不同基因型COX—2

2、啟動(dòng)子在香煙濃縮物刺激時(shí)的表達(dá)活性；用凝膠電泳遷移率變動(dòng)實(shí)驗(yàn)和染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)分析與不同等位基因結(jié)合的細(xì)胞核蛋白(轉(zhuǎn)錄因子)，并用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒定其成分；用蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞免疫熒光和RNA干擾實(shí)驗(yàn)探討香煙濃縮物刺激時(shí)核仁磷酸蛋白(nucleophosmin，NPM)與COX—2蛋白表達(dá)之間的關(guān)系。 結(jié)果：COX—2啟動(dòng)子區(qū)—1195G/A和—765G/C遺傳變異與胰腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，—1195AA

3、和—765CG基因型攜帶者發(fā)生胰腺癌風(fēng)險(xiǎn)顯著高于—1195GG和—765GG基因型攜帶者(OR=1.34；95％CI=1.12—1.60和OR=1.63；95％CI=1.25—2.10)。單體型分析結(jié)果顯示這兩個(gè)遺傳變異之間有協(xié)同作用，A_1195—C_765單體型攜帶者發(fā)生胰腺癌風(fēng)險(xiǎn)顯著高于G_1195—G_765單體型攜帶者。吸煙也是胰腺癌的危險(xiǎn)因素(OR=1.48；95％CI=1.26—1.74)，而且與—765G/C變異存在高于

4、相乘的交互作用。—765CG基因型的重度吸煙者患胰腺癌的OR為3.72(95％CI=1.70-8.14)，高于—765GG基因型吸煙者(OR=1.43；95％CI=1.21—1.69)和—765GC基因型不吸煙者(OR=1.44；95％CI=1.04—1.99)OR值的乘積(3.72>1.43×1.44)。報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果表明不同—765等位基因的基礎(chǔ)表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異，但在香煙濃縮物刺激后，—765C等位基因的表達(dá)高于—765G

5、等位基因。凝膠電泳遷移率變動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同的—765等位基因結(jié)合的核蛋白不同，質(zhì)譜鑒定及超遷移實(shí)驗(yàn)證明與—765C等位基因結(jié)合的核蛋白為磷酸化的NPM。經(jīng)香煙濃縮物刺激后，細(xì)胞核內(nèi)磷酸化NPM水平降低，結(jié)合于COX—2啟動(dòng)子區(qū)的磷酸化NPM也下降，但敲降NPM表達(dá)后COX—2蛋白表達(dá)水平降低。這些結(jié)果提示，磷酸化NPM特異性結(jié)合于—765C等位基因?qū)OX—2的表達(dá)起抑制作用，香煙濃縮物刺激后磷酸化NPM減少，從而使—765C等位基