SUFU和相關(guān)microRNAs在胰腺癌發(fā)病中的作用研究.pdf

1、本課題將SUFU及相關(guān)microRNAs作為研究靶點(diǎn)，深入研究其在胰腺癌發(fā)病中的作用。本研究包括三部分內(nèi)容，分述如下。 一、人胰腺癌組織細(xì)胞中SUFU基因的表達(dá) 目的：檢測(cè)在正常胰腺組織、胰腺癌組織和相應(yīng)癌旁組織及四株胰腺癌細(xì)胞株中SUFU基因mRNA的表達(dá)情況，探討SUFU在胰腺癌發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法：收集21例手術(shù)切除的胰腺癌組織及18例相應(yīng)癌旁組織和3例正常胰腺組織，四株胰腺癌細(xì)胞株為長(zhǎng)海消化內(nèi)科實(shí)驗(yàn)室

2、保存。采用Real-time RT-PCR法(SYBRGREEN法)檢測(cè)上述來(lái)源組織細(xì)胞中SUFU基因mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果：以正常胰腺組織為對(duì)照，21例胰腺癌組織和癌旁組織中SUFU mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為2.186±3.903和2.437±1.828，SUFU在癌組織與癌旁組織中表達(dá)無(wú)顯著差異(P＞0.05)。4株胰腺癌細(xì)胞株SUFU mRNA的相對(duì)表達(dá)量的3次獨(dú)立檢測(cè)均數(shù)依次為CFPAC0.375±0.01，Pan

3、c-12.184±0.03，SW19902.506±2.051，PaTu89881.027±0.137。 結(jié)論：SUFU在癌組織與癌旁組織中表達(dá)無(wú)顯著差異。 二、人胰腺癌組織中SUFU表達(dá)與臨床和病理特征的相關(guān)性研究 目的：在人胰腺癌組織和相應(yīng)癌旁組織中檢測(cè)SIJFU蛋白的表達(dá)情況，分析胰腺癌組織中SUFU蛋白表達(dá)水平與胰腺癌患者臨床和病理特征的相關(guān)性。檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞株中SUFU蛋白的表達(dá)情況。 方法：收

4、集2007年3月～2008年3月長(zhǎng)海醫(yī)院手術(shù)切除的28例胰腺癌患者的胰腺癌組織和相應(yīng)癌旁組織，同時(shí)收集患者臨床資料。所有病例均經(jīng)病理確診為胰腺導(dǎo)管腺癌。采用鏈霉素抗生物素-過(guò)氧化酶(streptavidin peroxidase，SP)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)胰腺癌和相應(yīng)癌旁組織中SUFU蛋白表達(dá)。細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)的棕黃色或棕褐色染色定位細(xì)胞染色陽(yáng)性。光鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)1000個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算染色陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)，同時(shí)設(shè)定染色細(xì)胞≥20％的組織

5、標(biāo)本為SUFU蛋白表達(dá)陽(yáng)性標(biāo)本。 結(jié)果：胰腺導(dǎo)管細(xì)胞癌的胞漿和胞核均可呈現(xiàn)SUFU蛋白染色。胰腺癌組織中78.57％(22/28)存在SUFU的陽(yáng)性表達(dá)，癌旁組織和正常胰腺組織中無(wú)SUFU蛋白陽(yáng)性表達(dá)，兩者之間存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。SUFU蛋白高表達(dá)與胰腺癌患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P＞0.05)，而與腫瘤的臨床分期呈顯著正相關(guān)。SUFU蛋白在胰腺癌細(xì)胞株P(guān)aTu8988和SW19

6、90中表達(dá)陽(yáng)性，蛋白定位在細(xì)胞核，CFPAC細(xì)胞株SUFU胞核胞漿表達(dá)，PANC-1細(xì)胞株SUFU蛋白無(wú)表達(dá)。 結(jié)論：78％的胰腺癌組織SUFU蛋白異常高表達(dá)，此高表達(dá)與患者的臨床分期呈正相關(guān)，提示SUFU異常高表達(dá)參與胰腺癌發(fā)生和發(fā)展，為胰腺癌惡性特征之一。 三、胰腺癌細(xì)胞株中SUFU相關(guān)microRNAs表達(dá)的檢測(cè)及與其mRNA和蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析 目的：在四株胰腺癌細(xì)胞株中檢測(cè)SUFU相關(guān)microRNA

7、s(miR-155和miR-107)的表達(dá)，并分析SUFU mRNA、蛋白質(zhì)和相關(guān)microRNAs表達(dá)的相關(guān)性。 方法：應(yīng)用預(yù)測(cè)軟件篩選出與SUFU相關(guān)的microRNAs的兩條，即miR-155、miR-107，利用SYBR Green實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)4株胰腺癌細(xì)胞株中miR-155、miR-107的表達(dá)，應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析胰腺癌細(xì)胞株中SUFU mRNA、蛋白質(zhì)和相關(guān)microRNAs表達(dá)的相關(guān)性。 結(jié)果

8、：各胰腺癌細(xì)胞株中miR-107和miR-155均高表達(dá)且程度不一，miR-107在胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)依次為Panc-1(9.33±1.26)，SW1990(8.05±1.08)，CFPAC(6.466±1.068)和Patu8988(3.51±0.10)，各組之間存在顯著差異(p＜0.05)。miR-155在胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)依次為CFPAC(488.7±43.063)，Panc-1(44.5±25.939)，SW1990(38.

9、8±15.04)和Patu8988(0.66±0.184)，各組之間存在顯著差異(p＜0.05)。相關(guān)性統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在細(xì)胞株中SUFU mRNA相對(duì)表達(dá)量與miR-107相對(duì)表達(dá)量呈正相關(guān)(Spearman’s R=0.755。p=0.031)，而與SUFU蛋白表達(dá)程度存在一定負(fù)相關(guān)性(Spearman’s R=-0.776，p=0.024)，即①在mRNA和miR-107相對(duì)表達(dá)量較高的PANC-1細(xì)胞中，SUFU蛋白表達(dá)陰性，提示

10、miR-107干擾了mRNA的翻譯；②在mRNA和miR-107相對(duì)表達(dá)量同時(shí)次之的SW1990和Patu8988細(xì)胞中，SUFU蛋白僅胞核表達(dá)；③在mRNA和miR-107相對(duì)表達(dá)量均較少的CFPAC細(xì)胞中，SUFU蛋白胞漿和胞核均表達(dá)。 結(jié)論：miR-155和miR-107在各胰腺癌細(xì)胞株均高表達(dá)，提示其在腫瘤發(fā)生中具有一定作用。但僅發(fā)現(xiàn)miR-107與SUFU mRNA相對(duì)表達(dá)量正相關(guān)，同時(shí)與SUFU蛋白表達(dá)負(fù)相關(guān)，提示僅