石河子及北屯地區(qū)豬TTV及PCV2的基因檢測(cè)及基因型分析.pdf

1、豬源輸血傳播病毒(Torque Teno virus,TTV)在世界大部分豬場(chǎng)都有較高的感染率。人源TTV感染人后,會(huì)發(fā)生重型肝炎等癥狀;圓環(huán)病毒2型(Circovirus type2,PCV2)是影響和誘發(fā)豬死亡和發(fā)病的重要病原之一。為了解石河子及北屯地區(qū)豬源TTV及PCV2的感染情況,并進(jìn)一步研究豬源TTV與圓環(huán)病毒2型間是否存在協(xié)同影響的作用,本研究對(duì)在石河子地區(qū)及北屯地區(qū)豬源樣品進(jìn)行了TTV和PCV2的基因檢測(cè),并對(duì)流行毒株的基

2、因型進(jìn)行了分析。
　　研究中采用康為世紀(jì)公司的血液基因組小量提取試劑盒,對(duì)石河子屠宰場(chǎng)隨機(jī)采集的206份豬抗凝血液、北屯地區(qū)屠宰場(chǎng)采集的72豬抗凝血液,及石河子周邊豬場(chǎng)采集的不同日齡仔豬抗凝血液50份、母豬的抗凝血液10份進(jìn)行DNA提取。根據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)合成了三對(duì)引物,建立了用于檢測(cè)TTV1、TTV2及PCV2的聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)檢測(cè)方法,在此基礎(chǔ)上,對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化,建立了

3、檢測(cè)TTV1和PCV2的雙重PCR檢測(cè)方法。利用本研究建立的PCR檢測(cè)方法,對(duì)采集樣品進(jìn)行檢查,同時(shí)選取部分陽(yáng)性樣品,對(duì)PCR產(chǎn)物采用瓊脂糖凝膠回收試劑盒進(jìn)行回收純化,對(duì)純化的PCR產(chǎn)物進(jìn)行TA克隆,經(jīng)PCR鑒定后進(jìn)行序列測(cè)定。主要結(jié)果如下:
　　1、石河子和北屯地區(qū)豬TTV1感染率為41.4％(140/338);TTV2的感染率為21.3%(72/338);TTV1和TTV2混合感染率為8.9%(30/338);PCV2的感染率

4、為4.3%(12/278)。
　　2、在石河子地區(qū)檢測(cè)的8例PCV2陽(yáng)性樣品中有5例為TTV1與PCV2混合感染,有1例為TTV2與PCV2混合感染,有1例為TTV1、TTV2與PCV2混合感染,一例為PCV2陽(yáng)性。在石河子周邊養(yǎng)豬場(chǎng)采集5份外觀為PCV2發(fā)病豬,進(jìn)行解剖,并進(jìn)行PCR檢測(cè),發(fā)現(xiàn)5份病豬全部為PCV2及TTV混合感染。
　　3、選取部分陽(yáng)性樣品進(jìn)行序列測(cè)定,將分離株的基因序列與Genbank登錄的已知豬TTV

5、1、TTV2、PCV2序列進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果顯示本研究獲得的TTV1序列與已報(bào)道序列的同源性為82.34%-95.59%;TTV2序列與已報(bào)道序列的同源性為83.75%-96.17%;所獲PCV2序列與PCV2a參照序列之間的同源性為86.4%-87.4%,與PCV2b參照序列之間的同源性為92.9%-96.4%,表明所獲PCV2序列為2b型。
　　4、建立了檢測(cè)TTV1和PCV2的雙重PCR方法。采用雙重PCR方法檢測(cè)檢測(cè)臨床樣品與