浙江地區(qū)幽門螺桿菌hrgA基因及優(yōu)勢基因型的研究.pdf

1、本實驗用PCR法檢測了H.pylori中hrgA的分布及其與疾病的關(guān)系，同時研究了cagA、vacA、iceA1、babA2等基因的存在情況，以期發(fā)現(xiàn)我省H.pylori中的優(yōu)勢基因型及其與疾病的關(guān)系。 研究材料和方法：收集浙江(杭州市、岱山縣等)地區(qū)因胃部不適接受胃鏡檢查患者的胃粘膜標(biāo)本，分離培養(yǎng)得到H.pylori132株。其中杭州市胃粘膜標(biāo)本分離培養(yǎng)得到H.pylori69株，浙江省岱山縣標(biāo)本分離培養(yǎng)得到H.pylori6

2、3株?；颊咧心行?9人，女性43人，年齡16～70歲，平均年齡45.6歲；經(jīng)胃鏡及病理學(xué)檢查診斷為慢性胃炎64例，消化性潰瘍56例，胃腺癌12例。將胃粘膜標(biāo)本研磨后均勻涂布在ECY選擇性培養(yǎng)基上，37℃微需氧(5％O2、10％CO2和85％N2)環(huán)境中培養(yǎng)5天后，經(jīng)系統(tǒng)鑒定(菌落特征、快速尿素酶試驗、氧化酶試驗、形態(tài)及染色特性)確認(rèn)為H.pylori者，進(jìn)一步傳代培養(yǎng)2天擴(kuò)增細(xì)菌。用標(biāo)準(zhǔn)酚/氯仿抽提法提取H.pylori基因組DNA，根

3、據(jù)文獻(xiàn)報道的引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)參數(shù)為95℃預(yù)變性3min后，94℃變性45s，54℃退火45s，72℃延伸45s，共30個循環(huán)，再于72℃延伸7min。用瓊脂糖凝膠電泳法檢測PCR產(chǎn)物，確定H.pylori臨床分離株的hrgA、cagA、vacA、iceA1、babA2各基因的陽性情況。各基因與疾病關(guān)系的分析采用x2檢驗，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。 研究結(jié)果和討論：H.pylori菌株各基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小均與報道

4、的一致。132株臨床分離的H.pylori中，hrgA基因陽性率為25.8％(34/132)，與國外文獻(xiàn)報道的亞洲菌株的研究結(jié)果一致。同一H.pylori中必存在hrgA或hpyⅢR，但兩者不同時存在或缺失。hrgA基因在慢性胃炎、消化性潰瘍和胃癌中的檢出率分別為23.4％、28.6％和25.0％，未見統(tǒng)計學(xué)差異。cagA基因的陽性率為100％(132/132)，vacAs1a為92.4％(122/132)，vacAm2為81.8％(1

5、08/132)，未檢測到vacAm1；iceA1基因型所占比例為83.3％(110/132)；babA2陽性率則為78.9％(104/132)。除vacAm2外其他各基因在慢性胃炎、消化性潰瘍及胃癌疾病分組間均未見統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。vacAm2在慢性胃炎、消化性潰瘍中的陽性率分別為71.9％(46/64)和92.9％(52/56)，x2檢驗結(jié)果為P＜0.01(P=0.003)，說明該基因陽性率在這兩組疾病中存在顯著差異。由于胃

6、癌樣本量偏少，故vacAm2基因陽性率在慢性胃炎與胃癌組、消化性潰瘍與胃癌組之間未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學(xué)差異。 研究結(jié)論：浙江地區(qū)H.pylori中hrgA基因陽性率為25.8％，符合國外文獻(xiàn)報道的亞洲菌株的研究結(jié)果；同一H.pylori中必存在hrgA或hpyⅢR，但兩者不同時存在或缺失，與國外文獻(xiàn)報道一致。hrgA基因在慢性胃炎、消化性潰瘍和胃癌中的檢出率未見統(tǒng)計學(xué)差異。cagA、vacAs1a/m2、iceA1、babA2為浙江地區(qū)