甲醛對Rab26基因與CDKN2B基因體外表達(dá)的影響.pdf

1、近年來隨著人民生活水平的提高，家庭和辦公用房的室內(nèi)裝潢已必不可少，人們在追求美好生活的同時，卻被裝潢材料中的有害物質(zhì)困擾。裝潢材料中常有少量甲醛未被化合，可從裝潢材料中逐漸釋放出來污染室內(nèi)空氣，對人體產(chǎn)生危害。甲醛以其來源廣，毒性大，污染水平高，污染時間長等特點，已經(jīng)成為我國最主要的室內(nèi)空氣污染物之一，也是世界環(huán)境衛(wèi)生領(lǐng)域的熱點和難點。探討甲醛的遺傳毒性，毒性機制等，對全面和系統(tǒng)的了解甲醛的遺傳毒性的致癌性，進(jìn)一步評價和改善室內(nèi)空氣質(zhì)量

2、具有十分重要的意義，并為制定安全的環(huán)境和職業(yè)濃度提供更科學(xué)的依據(jù)。本文采用SDS-KCL沉淀法、PCR、RT-PCR等技術(shù)，origin，gene-tool等生物信息學(xué)軟件分析手段，選用體外培養(yǎng)的HEK293細(xì)胞及Hela細(xì)胞為材料，對甲醛導(dǎo)致DPC及DPC的毒作用機制進(jìn)行了系統(tǒng)研究。主要包括以下幾方面： 1．甲醛導(dǎo)致DNA．蛋白質(zhì)交聯(lián)效應(yīng)DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)(DNA-protein crosslinks，DPC)在正常細(xì)胞內(nèi)有一

3、定的背景值，行使一定的生物學(xué)功能，是DNA與核蛋白的正常聯(lián)系或其代謝結(jié)果，當(dāng)生物大分子受到外來環(huán)境污染物或化學(xué)致癌物(如甲醛)作用時，則可誘導(dǎo)出超量的DPC，且DPC僅發(fā)生在單鏈上，這表明這種交聯(lián)只能發(fā)生在DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄期間，因此，形成DPC對DNA的構(gòu)象和功能(復(fù)制和轉(zhuǎn)錄)都會產(chǎn)生影響，又因與其他損傷相比較難修復(fù)，因此在DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄時容易造成一些重要基因(如抑癌基因)的丟失。 本研究以體外培養(yǎng)的HEK293細(xì)胞為材料，設(shè)

4、置不同濃度，采用SDS-KCL沉淀法對甲醛致DPC效應(yīng)進(jìn)行了探討，實驗結(jié)果顯示：液態(tài)甲醛在低濃度(62.5umol/L，125umol/L)時，DPC含量與對照組沒有極顯著性差異，當(dāng)液態(tài)甲醛在高濃度(250umol/L，500umol/L，1000umol/L，2000umol/L)時，DPC含量與對照組有極顯著性差異(P<0.01)，因此，以大于或等于250umol/L作為后續(xù)實驗的染毒濃度。 2．DPC對復(fù)制的影響自1969

5、年Brutlag首次報導(dǎo)甲醛可誘導(dǎo)DPC以來，關(guān)于DPC的研究大量都集中在對其生化特性，修復(fù)機制及其與甲醛的劑量效應(yīng)上，而關(guān)于其作為生物標(biāo)志物所產(chǎn)生的長期生物效應(yīng)的研究卻很少，有報道用基因芯片技術(shù)檢測出甲醛染毒后P344大鼠鼻呼吸道上皮細(xì)胞基因表達(dá)異常，其中，Rab26基因與CDKN2B基因表達(dá)量下調(diào)。本研究分別選HEK293細(xì)胞中的Rab26基因與Hela細(xì)胞中的CDKN2B基因，染毒后通過PCR技術(shù)體外擴增，結(jié)果顯示：伴隨甲醛濃度增