山羊胎盤催乳素的不同檢測方法及其在胎盤組織的定位研究.pdf

1、胎盤在提供胎兒理想的生長環(huán)境中扮演重要的角色，它不但是母體與胎兒之間營養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的轉(zhuǎn)運位點，而且還是抗病原的屏障，以及分泌激素、生長因子、細胞因子和其它生物活性物質(zhì)的器官。反芻動物的胎盤催乳素屬于生長激素/催乳素基因家族，它們由滋養(yǎng)外胚層雙核細胞合成。胎盤催乳素的結(jié)構(gòu)和生物活性在牛、綿羊和山羊上都已經(jīng)進行過研究。與生長激素相比，反芻動物胎盤催乳素與垂體催乳素具有更大的結(jié)構(gòu)同源性，雖然它們都能與催乳素和生長素受體結(jié)合。山羊胎盤催乳素

2、和綿羊胎盤催乳素分子量都在23000Da，然而，牛胎盤催乳素由于糖基化的作用分子量要大(31000Da到34000Da之間)。胎盤催乳素既分泌到胎兒血液循環(huán)中也分泌到母體血液循環(huán)中。胎兒體內(nèi)胎盤催乳素的濃度隨妊娠的進行而逐漸增高，鑒于此，母體血液循環(huán)中的胎盤催乳素的濃度妊娠后1/3時期達到高峰并且維持較高的水平。此外，山羊和綿羊母體胎盤催乳素的濃度比牛的胎盤催乳素濃度高100～1000倍。雖然從胎盤的重量和營養(yǎng)看，胎盤好象起到重要的作用

3、，但是調(diào)控胎盤催乳素分泌的確切因素尚不明確。 本實驗利用來自屠宰場和剖腹產(chǎn)獲取的胎盤和血液，通過運用普通光學顯微鏡和透射電子顯微鏡對胎盤組織中的各類細胞，尤其是滋養(yǎng)層單核和雙核細胞進行形態(tài)的觀察，達到確定細胞種類并且分析細胞相關(guān)成分的目的；通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測胎盤組織中相關(guān)蛋白質(zhì)的表達情況；通過反轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法檢測胎盤組織和母體血漿中胎盤催乳素信使RNA(mRNA)。

4、制備小鼠抗重組山羊胎盤催乳素(rcPL)多克隆抗體，并利用此抗體在山羊胎盤中定位胎盤催乳素。用rcPL對6-8周齡的昆明小鼠進行免疫注射制備多抗，第三次加強免疫后第6天采集少許血清，用瓊脂凝膠免疫擴散(AGID)和間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測抗體的產(chǎn)生情況；分娩后立即通過剖腹產(chǎn)的方法獲得山羊胎盤組織，用獲得的抗血清通過免疫組織化學(IHC)和間接熒光抗體試驗(IFA)的方法定位胎盤催乳素。瓊脂擴散檢測抗原濃度為100μg/ml