轉(zhuǎn)移因子納米脂質(zhì)體的制備及臨床效果研究.pdf

1、通過(guò)轉(zhuǎn)移因子納米脂質(zhì)體的制備與抗病毒效果研究，為臨床病毒性疾病提供新的防治手段和方法，為解決動(dòng)物食品安全問(wèn)題提供新途徑。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)采集健康的肉仔雞脾臟，透析法制備非特異性TF，冷凍干燥制成凍干粉，稀釋?zhuān)?jīng)檢測(cè)TF稀釋液蛋白反應(yīng)陰性、多肽含量大于0.1mg/ml、OD<,260>/OD280為2.39，含有17種氨基酸。結(jié)果與資料報(bào)道TF質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)相一致。 采用逆相蒸發(fā)法，通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以包封率為優(yōu)選指標(biāo)，確定TF

2、NL的最佳制備方案。并在電鏡下觀察最佳方案制備的TFNL形態(tài)，檢測(cè)包封率，不同時(shí)間的滲透率及電鏡下的融合情況。結(jié)果顯示最佳方案為：卵磷脂/膽固醇(摩爾比)為2：1，TF濃度為6mg/ml，吐溫-80為1ml，有機(jī)相/水相(體積比)為4：1。電鏡下大部分脂質(zhì)體粒徑小于100nm，分布均勻，包封率高達(dá)49.5％。隨放置時(shí)間延長(zhǎng)，TFNL顆粒發(fā)生融合，滲透率增加，但滲透速度并沒(méi)有加快，到4.5個(gè)月是滲透率已達(dá)52.4％。電鏡觀察及滲透率結(jié)果顯

3、示，脂質(zhì)體具有一定的穩(wěn)定性，保質(zhì)期確定為4.5個(gè)月。 通過(guò)生物學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)TFNL的安全性、熱源性、過(guò)敏性，E一玫瑰花環(huán)試驗(yàn)和巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)檢測(cè)對(duì)細(xì)胞免疫的影響。結(jié)果顯示：TFNL無(wú)毒、無(wú)熱源性、無(wú)過(guò)敏性，E一玫瑰花環(huán)結(jié)花率升高，巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象明顯，說(shuō)明TFNL具有促進(jìn)細(xì)胞免疫功能。 通過(guò)給小鼠口服，然后取實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠的同段小腸，HE染色光鏡下觀察，做超薄切片電鏡下觀察。結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組小鼠的小腸絨毛表面和根部有

4、明顯的TFNL顆粒，而對(duì)照組中有極少數(shù)脂滴出現(xiàn)。說(shuō)明脂質(zhì)體包被TF后可以使TF避免胃酸酶的降解，并且在腸道內(nèi)吸收良好。 采用改良寇氏法測(cè)定TFNL防治病毒病的半數(shù)有效濃度，而后進(jìn)行抗病毒試驗(yàn)：將雞分組免疫、口服藥物，后攻NDV，進(jìn)行臨床癥狀、抗體變化、死亡率、鏡下病變等相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。結(jié)果顯示：ED<,50>為0.07mg/ml，臨床濃度為0.14 mg/ml；TFNL抗NDV效果：各試驗(yàn)組均具有不同程度的抗病毒作用，而TFNL與

5、疫苗合用抗病毒效果最好，TF與疫苗合用組其次，疫苗組次之。 TFNL，治療人工感染REV后發(fā)病的雞，結(jié)果顯示：TFNL的應(yīng)用減緩了疾病進(jìn)程，具有一定的積極作用，但病雞最后還是以死亡告終。說(shuō)明TFNL對(duì)KEV有一定治療意義，但臨床應(yīng)用的價(jià)值不大。 本研究表明TFNL無(wú)毒、無(wú)副作用，性質(zhì)穩(wěn)定，保質(zhì)期為4.5個(gè)月，腸道內(nèi)吸收良好；非特異性TFNL作為疫苗佐劑顯示了強(qiáng)大的抗病毒作用。因此，TFNIL作為疫苗佐劑在生產(chǎn)實(shí)踐中具有巨大的推廣