轉移因子納米脂質體的制備及臨床效果研究.pdf

1、通過轉移因子納米脂質體的制備與抗病毒效果研究，為臨床病毒性疾病提供新的防治手段和方法，為解決動物食品安全問題提供新途徑。 本實驗通過采集健康的肉仔雞脾臟，透析法制備非特異性TF，冷凍干燥制成凍干粉，稀釋，經(jīng)檢測TF稀釋液蛋白反應陰性、多肽含量大于0.1mg/ml、OD<,260>/OD280為2.39，含有17種氨基酸。結果與資料報道TF質量控制標準相一致。 采用逆相蒸發(fā)法，通過正交試驗設計，以包封率為優(yōu)選指標，確定TF

2、NL的最佳制備方案。并在電鏡下觀察最佳方案制備的TFNL形態(tài)，檢測包封率，不同時間的滲透率及電鏡下的融合情況。結果顯示最佳方案為：卵磷脂/膽固醇(摩爾比)為2：1，TF濃度為6mg/ml，吐溫-80為1ml，有機相/水相(體積比)為4：1。電鏡下大部分脂質體粒徑小于100nm，分布均勻，包封率高達49.5％。隨放置時間延長，TFNL顆粒發(fā)生融合，滲透率增加，但滲透速度并沒有加快，到4.5個月是滲透率已達52.4％。電鏡觀察及滲透率結果顯

3、示，脂質體具有一定的穩(wěn)定性，保質期確定為4.5個月。 通過生物學試驗檢測TFNL的安全性、熱源性、過敏性，E一玫瑰花環(huán)試驗和巨噬細胞吞噬試驗檢測對細胞免疫的影響。結果顯示：TFNL無毒、無熱源性、無過敏性，E一玫瑰花環(huán)結花率升高，巨噬細胞吞噬現(xiàn)象明顯，說明TFNL具有促進細胞免疫功能。 通過給小鼠口服，然后取實驗組與對照組小鼠的同段小腸，HE染色光鏡下觀察，做超薄切片電鏡下觀察。結果顯示：實驗組小鼠的小腸絨毛表面和根部有

4、明顯的TFNL顆粒，而對照組中有極少數(shù)脂滴出現(xiàn)。說明脂質體包被TF后可以使TF避免胃酸酶的降解，并且在腸道內(nèi)吸收良好。 采用改良寇氏法測定TFNL防治病毒病的半數(shù)有效濃度，而后進行抗病毒試驗：將雞分組免疫、口服藥物，后攻NDV，進行臨床癥狀、抗體變化、死亡率、鏡下病變等相關指標檢測。結果顯示：ED<,50>為0.07mg/ml，臨床濃度為0.14 mg/ml；TFNL抗NDV效果：各試驗組均具有不同程度的抗病毒作用，而TFNL與

5、疫苗合用抗病毒效果最好，TF與疫苗合用組其次，疫苗組次之。 TFNL，治療人工感染REV后發(fā)病的雞，結果顯示：TFNL的應用減緩了疾病進程，具有一定的積極作用，但病雞最后還是以死亡告終。說明TFNL對KEV有一定治療意義，但臨床應用的價值不大。 本研究表明TFNL無毒、無副作用，性質穩(wěn)定，保質期為4.5個月，腸道內(nèi)吸收良好；非特異性TFNL作為疫苗佐劑顯示了強大的抗病毒作用。因此，TFNIL作為疫苗佐劑在生產(chǎn)實踐中具有巨大的推廣