蛋白納米脂質(zhì)體制備過(guò)程中的活性保護(hù)研究.pdf

1、為研究蛋白和多肽類藥物在制劑過(guò)程中的活性變化及其機(jī)理,減少藥物在制劑過(guò)程中的活性損失,本文以胰蛋白酶為模型藥物制備納米脂質(zhì)體,研究制備過(guò)程中胰蛋白酶的活性變化,并添加四種活性保護(hù)劑保護(hù)蛋白活性,通過(guò)檢測(cè)蛋白的結(jié)構(gòu)變化和分子動(dòng)力學(xué)模擬過(guò)程來(lái)考察保護(hù)劑保護(hù)蛋白活性的機(jī)制。
　　 1,采用逆向蒸發(fā)法制備胰蛋白酶納米脂質(zhì)體,粒徑160nm,包封率為47％,Zeta電位-58mv;胰蛋白酶在脂質(zhì)體制備過(guò)程中活性損失為原始蛋白的37％,四種

2、保護(hù)劑中PEG對(duì)活性的保護(hù)效果最好,可使活性保留為原始蛋白的46％,是一種良好的保護(hù)劑。
　　 2,采用圓二色譜和傅里葉紅外光譜研究胰蛋白酶在制劑過(guò)程中的二級(jí)結(jié)構(gòu)變化,應(yīng)用熒光光譜研究蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)變化。圓二色譜顯示胰蛋白酶在納米脂質(zhì)體制備過(guò)程中其二級(jí)結(jié)構(gòu)中的α-螺旋含量由18.7％降為13.2％,β-折疊和β-轉(zhuǎn)角含量分別由15.6％和27.0％增加到20.3％和31.9％,紅外結(jié)果顯示相同趨勢(shì)。熒光數(shù)據(jù)表明有機(jī)溶劑處理后蛋白

3、熒光性增加,制備成脂質(zhì)體后熒光性減小,分子更加致密。四種保護(hù)劑的加入可以使蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)得到保留,其中PEG的保護(hù)效果最佳,但對(duì)三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化影響不大。
　　 3,采用flexX對(duì)接和amber軟件對(duì)保護(hù)劑中最簡(jiǎn)單的分子精氨酸和胰蛋白酶活性中心進(jìn)行了分子對(duì)接和分子模擬,研究精氨酸與胰蛋白酶的作用機(jī)制。結(jié)果顯示精氨酸可進(jìn)入到胰蛋白酶的活性腔道中,并與之可形成7對(duì)氫鍵,兩者結(jié)合力很強(qiáng),理論上可以維持蛋白活性腔的三維結(jié)構(gòu),保護(hù)活性腔不