腎臟內(nèi)髓環(huán)氧化酶2對水鈉代謝和血壓調(diào)節(jié)的影響.pdf

1、第一部分自發(fā)性高血壓大鼠(SHR大鼠)腎臟內(nèi)髓環(huán)氧化酶2對水鈉代謝及血壓的影響。 目的：以往研究顯示腎臟內(nèi)髓環(huán)氧化酶2(Cyclooxygenase 2，COX2)有可能參與水鹽代謝及血壓的調(diào)節(jié)，為此本研究選擇先天性高血壓動物模型，即自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously hypertensive rat，SHR)作為對象，觀察腎臟內(nèi)髓COX2的表達以及不同鹽負荷狀態(tài)下COX2的改變。 方法：6周齡SHR大鼠及其對

2、照WKY大鼠各12只，隨機分為低鹽組和高鹽組(WKY-LS組，WKY-HS組，SHR-LS組，SHR-HS組)，分別給予高鹽(含8％NaCl)和低鹽(含0.04％NaCl)飲食3天，觀察基礎狀態(tài)及不同鹽負荷前后大鼠尾動脈收縮壓、血鈉濃度、24小時尿量(UV)、尿鈉(UNa)以及COX2代謝物6-keto prostaglandin F1a(6k-PGF1a)排泄情況，應用免疫組化和Western Blot的方法檢測腎臟內(nèi)髓COX2蛋白表

3、達，分析COX2表達水平與UV、UNa，的相關性。 結果：基礎狀態(tài)下，SHR大鼠尾動脈收縮壓明顯高于WKY大鼠。給予不同鹽負荷3天后，WKY大鼠收縮壓無明顯改變，SHR低鹽組收縮壓無變化，但SHR高鹽組收縮壓明顯升高。給予低鹽飲食的各組大鼠血鈉濃度無顯著差別，但高鹽飲食組SHR大鼠血鈉濃度顯著高于WKY大鼠，也較SHR低鹽組顯著升高。與各自基礎狀態(tài)相比，低鹽飲食后兩種大鼠的24h尿量(UV)和24h尿鈉(UNa)排泄顯著降低，高

4、鹽飲食后則顯著增加；SHR大鼠的UV和UNa排泄在高鹽狀態(tài)下與WKY大鼠相比明顯低下。SHR和WKY大鼠尿COX2代謝物6k-PGF1a的排泄對鹽負荷的反應也類似，高鹽組均較低鹽組明顯增加，但同樣鹽負荷狀態(tài)下兩組之間無差別。免疫組化顯示腎臟內(nèi)髓COX2主要表達于髓質(zhì)間質(zhì)細胞，基礎狀態(tài)下SHR與WKY大鼠無顯著差異，給予低鹽飲食后亦無顯著改變，但給予高鹽飲食后無論是WKY大鼠還是SHR大鼠腎臟內(nèi)髓COX2表達均顯著增加。Western B

5、lot進一步證實高鹽可誘導WKY及SHR大鼠腎臟內(nèi)髓COX2蛋白表達較低鹽組顯著增加，但WKY和SHR大鼠之間無顯著差異。 結論:SHR大鼠腎臟水鹽排泄功能受損，高鹽飲食后血壓進一步升高，水鈉潴留，同時伴有腎臟內(nèi)髓COX2表達升高；但不同鹽負荷對SHR大鼠腎臟內(nèi)髓COX2表達的影響與WKY大鼠相同；提示腎臟內(nèi)髓COX2參與了水鹽代謝的調(diào)節(jié)，且在SHR大鼠中表達正常，可能并非該動物模型高血壓形成及水鈉潴留的關鍵因素。 第二

6、部分自發(fā)性2型糖尿病模型(OLETF大鼠)腎臟內(nèi)髓環(huán)氧化酶2對水鈉代謝及血壓的影響。 目的:大量臨床和動物實驗證實肥胖和高血壓明顯相關，但目前肥胖致高血壓的機制尚未完全闡明。因此，本部分即選用肥胖性高血壓動物模型，即自發(fā)性2型糖尿病OLETF大鼠(Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty rat)作為研究對象，觀察腎臟內(nèi)髓COX2在不同鹽負荷和全身應用環(huán)氧化酶-2選擇性抑制劑(selective COX

7、2 inhibitor，coxib)時的表達情況及其在肥胖性高血壓發(fā)病中的意義。 方法：14周齡OLETF大鼠及其對照LETO大鼠各24只，監(jiān)測體重、血糖及血壓變化，至30周齡成模時隨機分為低鹽組、高鹽組、低鹽+塞萊昔布(celecoxib)組和高鹽+塞萊昔布組(LETO-LS組，LETO-HS組，LETO-LS+celecoxib組，LETO-HS+celecoxib組，OLETF-LS組，OLETF-HS組，OLETF-LS

8、+celecoxib組，OLETF-HS+celecoxib組)。在低鹽(含0.04％NaCl)飲食誘導4天后分別再給予高鹽(含8％NaCl)和低鹽飲食3天。觀察不同鹽負荷前后大鼠血脂、脂肪細胞因子、收縮壓、血鈉濃度、24小時尿量(UV)、尿鈉(UNa)以及COX2代謝物6k-PGF1a排泄情況，應用Western Blot的方法檢測腎臟內(nèi)髓COX2蛋白表達，最后分析各指標的相關性。 結果：30周齡時，OLETF大鼠體重、餐后血

9、糖、血脂和血壓均明顯高于相同年齡的LETO大鼠。給予不同鹽負荷或鹽負荷合并應用塞萊昔布3天后，兩種大鼠血壓均無明顯改變。兩種大鼠每日攝鈉總量無差別，但高鹽組均顯著高于低鹽組。給予低鹽飲食的各組大鼠血鈉濃度無顯著差別，但高鹽飲食組OLETF大鼠血鈉濃度顯著高于LETO大鼠，也較OLETF低鹽組顯著升高；塞萊昔布組大鼠血鈉濃度未見升高。高鹽飲食顯著增加各組大鼠的尿量和尿鈉，使用塞萊昔布，對低鹽飲食的兩種大鼠影響較?。桓啕}飲食時兩種大鼠表現(xiàn)相

10、反，LETO大鼠尿鈉和尿量變化迅速且增幅大，OLETF大鼠則反應遲緩，且出現(xiàn)下降。OLETF和LETO大鼠尿COX2代謝物6k-PGF1a的排泄對鹽負荷的反應也類似，高鹽組均較低鹽組明顯增加，但同樣鹽負荷狀態(tài)下兩組之間無差別；應用塞萊昔布后，兩種大鼠尿COX2代謝物6k-PGF1a的排泄明顯下降。Western Blot證實OLETF大鼠腎臟內(nèi)髓COX2蛋白表達無論在低鹽、高鹽，還是應用塞萊昔布時都顯著高于LETO大鼠；兩種大鼠在高鹽飲

11、食及口服塞萊昔布誘導下腎臟內(nèi)髓COX2蛋白表達顯著增加。 結論：OLETF大鼠腎臟尿鈉排泄功能受損，存在水鈉潴留伴血壓升高；其腎臟內(nèi)髓COX2表達顯著升高，可能是代償性的增加以促進水鈉排泄。應用塞萊昔布后，腎臟內(nèi)髓COX2表達可反饋性表達上調(diào)，但代謝產(chǎn)物顯著下降，提示其生物功能受到抑制，OLETF大鼠水鈉排泄下降，水鈉潴留加重，在用藥早期和低鹽飲食時這一副作用最為明顯，提示腎臟內(nèi)髓COX2參與了水鹽代謝的調(diào)節(jié)，尤其是在低鹽飲食時