基于c-myc啟動(dòng)子的抗腫瘤藥物篩選系統(tǒng).pdf

1、藥物篩選是我國(guó)新藥研發(fā)的瓶頸。為此本文建立了基于c-myc啟動(dòng)子的新型抗腫瘤藥物篩選系統(tǒng)，用于抗腫瘤藥物的篩選和研究藥物作用機(jī)理，并對(duì)這一系統(tǒng)從原則上進(jìn)行了驗(yàn)證。 本文將含有c-myc啟動(dòng)子和β-半乳糖苷酶報(bào)告基因的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染U2OS細(xì)胞，篩選在c-myc啟動(dòng)子控制下穩(wěn)定表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)胞株。為進(jìn)行原理驗(yàn)證，使用阿霉素、五氟尿嘧啶、順氯鉑等常用抗腫瘤藥物通過(guò)檢測(cè)β-半乳糖苷酶活性來(lái)分析該穩(wěn)定表達(dá)株的篩選效果。還采用了半定

2、量RT-PCR檢測(cè)內(nèi)源RNA，MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率等方法對(duì)該藥物篩選系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證。并使用c-myc啟動(dòng)子的缺失突變型對(duì)阿霉素的作用位點(diǎn)進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在U2OS細(xì)胞中阿霉素能顯著下調(diào)c-myc啟動(dòng)子的活性和c-myc mRNA的量，并發(fā)現(xiàn)阿霉素對(duì)c-myc啟動(dòng)子的作用位點(diǎn)在+66位的P2 啟動(dòng)子。 綜合以上結(jié)果，本文認(rèn)為這一基于c-myc啟動(dòng)子的抗腫瘤藥物篩選系統(tǒng)能夠有效篩選對(duì)癌基因c-myc有抑制作用的抗癌藥物。同時(shí)阿