妊娠對(duì)小鼠皮膚移植的影響及可能機(jī)制的初步探索.pdf

1、目的：高效非特異性免疫抑制劑的迅速發(fā)展和臨床廣泛應(yīng)用使同種器官移植取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，急性排斥率明顯降低，器官短期存活率顯著提高。但是數(shù)十年來(lái)，由于慢性排斥和免疫抑制劑的毒副作用，移植器官的長(zhǎng)期存活率仍無(wú)明顯改善。因此誘導(dǎo)特異性移植耐受，預(yù)防急慢性排斥反應(yīng)，減少藥物的毒副作用，避免長(zhǎng)期服用免疫抑制劑就成為解決移植器官長(zhǎng)期存活的關(guān)鍵問(wèn)題。 Medawar在1953年提出胎兒是類(lèi)似于母體的同種異體移植物這個(gè)概念來(lái)闡釋母體與胎兒之間的免

2、疫關(guān)系。在妊娠過(guò)程中母體免疫系統(tǒng)必須對(duì)持續(xù)表達(dá)父源性抗原的同種異基因胎兒保持耐受而不影響母體抗感染的免疫反應(yīng)。所以認(rèn)為妊娠過(guò)程是處于免疫耐受狀態(tài)。在人類(lèi)發(fā)現(xiàn)許多自身免疫性疾病如類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化等患者在妊娠時(shí)期癥狀有所緩解而在分娩后復(fù)發(fā)，并且在相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中也有類(lèi)似發(fā)現(xiàn)。因此，我們希望通過(guò)觀察妊娠過(guò)程中進(jìn)行外周器官移植是否可以延長(zhǎng)移植物的存活時(shí)間來(lái)評(píng)價(jià)妊娠過(guò)程是否對(duì)于外周器官移植具有保護(hù)作用。 本研究旨在通過(guò)提取妊娠小鼠與

3、非妊娠小鼠脾中的單個(gè)核細(xì)胞與父系雄鼠的脾細(xì)胞進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)來(lái)評(píng)價(jià)妊娠時(shí)期母體外周細(xì)胞免疫反應(yīng)的變化；通過(guò)在妊娠初期的小鼠背部移植父系雄鼠的皮膚來(lái)觀察妊娠是否能夠?qū)ν庵芤浦财鞴倨鸨Ｗo(hù)作用；并且通過(guò)比較妊娠前后脾與子宮HO-1 mRNA表達(dá)的差異來(lái)初步探討妊娠過(guò)程中保護(hù)性分子HO-1在外周器官脾以及與胎兒直接接觸的子宮的變化差異。 實(shí)驗(yàn)方法：采用清潔級(jí)雌性健康小鼠C57BL／6(H2b)54只，雄性小鼠。BALB／c(H2d)

4、24只，體重為18——23g。先通過(guò)6只C57BL/6小鼠互相行同系皮膚移植來(lái)建立皮膚移植模型。將48只C57BL／6雌鼠隨機(jī)平均分成細(xì)胞反應(yīng)組與皮膚移植組，其中每小組又分為妊娠組(Pre)與空白對(duì)照組(N-Pre)，每組12只。妊娠組小鼠與BALB／c雄性小鼠同籠使之懷孕。細(xì)胞反應(yīng)組小鼠于孕14天被處死，提取脾臟PBMC與BALB／c雄鼠脾細(xì)胞進(jìn)行單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，通過(guò)計(jì)算刺激指數(shù)(Stimulating Index，SI)來(lái)評(píng)價(jià)

5、其細(xì)胞免疫反應(yīng)的強(qiáng)度；同時(shí)取脾、子宮組織約100mg，無(wú)菌PBS清洗，-80℃保存，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)評(píng)價(jià)妊娠與非妊娠小鼠外周(脾)與母胎接觸面(子宮)HO-1mRNA表達(dá)的差異，通過(guò)計(jì)算Ct值的差異來(lái)衡量；皮膚移植組小鼠于孕6天接受來(lái)自于BALB／c雄鼠的皮膚移植，用平均存活時(shí)間(mean survival time，MST)來(lái)進(jìn)行比較。統(tǒng)計(jì)分析用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件完成。 結(jié)果:BALB／c雄鼠的脾細(xì)胞分別與妊娠組與非

6、妊娠對(duì)照組C57BL／6雌鼠的外周單個(gè)核細(xì)胞與進(jìn)行混合培養(yǎng)，刺激效應(yīng)細(xì)胞增殖程度的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。同系C57BL／6小鼠皮膚移植皮片平均存活時(shí)間>30天，同種異基因皮膚移植中對(duì)照組(未妊娠組)小鼠移植皮片平均存活時(shí)間為(7.08±1.08)d，妊娠組的皮片平均存活時(shí)間為(7.67_+0.89)d，移植皮片存活時(shí)間沒(méi)有出現(xiàn)明顯延長(zhǎng)，差別不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法對(duì)妊娠組與非妊娠組脾與子宮HO-1 mRN

7、A表達(dá)差異進(jìn)行定量檢測(cè)，以管家基因GAPDH作為對(duì)照進(jìn)行比較。結(jié)果顯示妊娠組脾臟HO-1 mRNA表達(dá)水平較非妊娠組增加了(1.56±0.05)倍，而妊娠組的子宮HO-1 mRNA的表達(dá)水平則增加了(2.21±0.03)倍。妊娠組子宮中HO-1 mRNA表達(dá)的升高程度較脾中的升高更為顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論:1、小鼠妊娠組母體外周細(xì)胞免疫反應(yīng)并未比非妊娠組有所減弱2、在小鼠妊娠早期進(jìn)行的皮膚移植與未妊娠小