大鼠室周器官小膠質細胞在實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎不同時期的形態(tài)學觀察.pdf

1、目的：室周器官(circumvent ricular organs，CVOs)作為腦的窗口(windows of the brain)缺乏血腦屏障，但是存在免疫屏障的加強。小膠質細胞是中樞神經系統(tǒng)中主要的宿主巨噬細胞。它的存在對于室周器官存在免疫加強發(fā)揮著重要的作用。實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎(experimental allergicencephalomyelitis)是人類多發(fā)性硬化的經典動物模型，其典型病理改變?yōu)槊撍枨?、血管周圍和腦

2、室周圍的炎細胞浸潤以及血腦屏障的破壞。室周器官在EAE發(fā)病的過程中在形態(tài)學和細胞凋亡等方面變化都發(fā)生了顯著的改變。本研究旨在通過觀察穹窿下器和正中隆起小膠質細胞的分布、形態(tài)以及其在EAE發(fā)病的不同時間點(正常、潛伏期、發(fā)病極期、回復后期)的形態(tài)學變化，以探討室周器官處小膠質細胞在腦內免疫狀態(tài)改變時的作用，進一步揭示室周器官在EAE發(fā)病過程中的免疫調節(jié)作用。 方法：清潔級Wistar雌性大鼠60只，3月齡，體重230g～250g，

3、由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供。實驗動物予以GPSCH+CFA免疫抗原足墊內注射，制備EAE動物模型。分別取正常對照組、潛伏期(免疫后10天組)、發(fā)病極期(免疫后發(fā)病4分組)，恢復期(發(fā)病后恢復為2分組)作為實驗的研究對象。光鏡標本制備：實驗動物用4％的多聚甲醛灌注固定，取含有穹窿下器和正中隆起的腦塊制備成石蠟切片，供蘇木素-伊紅染色及RCA-1組織化學染色用。電鏡標本制備：以含4％多聚甲醛和2.5％戊二醛的混合固定液進行灌注固定。取包

4、含穹窿下器和正中隆起的組織供透射電鏡標本制備用。統(tǒng)計學處理：小膠質細胞采用麥克奧迪數碼醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)(Motic Med6.0)記錄細胞數目、胞體直徑及突起長短。數據用均數加減標準差(x±s)表示。應用SNK-q檢驗，進行兩兩比較，以P＜0.05為有顯著性差異。 結果：HE染色結果：SFO和ME在潛伏期均可見細胞數目較正常對照組增多，增多的細胞體積較小。在發(fā)病極期細胞增多更加顯著，形狀多樣。在恢復期又逐漸與正常對照組相似。RC

5、A-1組化染色結果：正常組對照組SFO和ME的小膠質細胞都以阿米巴狀和分枝狀兩種狀態(tài)存在。在潛伏期和發(fā)病極期，靜息態(tài)小膠質細胞大量被激活，數目增加，胞體增大，突起數目減少、長度變短，并在發(fā)病極期達到峰值。隨著EAE癥狀的好轉恢復期小膠質細胞數目逐漸減少，胞體大小逐漸恢復正常，突起數目增多且長度增加。透射電鏡結果：正常對照組可見SFO和ME的小膠質細胞內僅能見到少量的溶酶體；胞核上的染色質分布均勻，電子密度低。在潛伏期和發(fā)病極期溶酶體數目

6、增多、體積增大，并可見吞飲小泡；胞核上的染色質邊集、濃縮，間距增寬，電子密度升高，在發(fā)病極期出現(xiàn)高峰?；謴推谟^察到溶酶體數目較發(fā)病極期減少，體積縮?。话松系娜旧|分布情況和電子密度接近正常對照組。 結論： 1、室周器官的小膠質細胞在正常情況下存在兩種狀態(tài)：激活態(tài)和靜息態(tài)，與相鄰腦區(qū)的只存在靜息態(tài)小膠質細胞的情況不同。說明室周器官能夠即時對外界的刺激發(fā)生反應，室周器官雖然缺乏血腦屏障，但它有免疫屏障的加強，從而使得整個腦