大鼠室周器官小膠質(zhì)細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎不同時(shí)期的形態(tài)學(xué)觀察.pdf

1、目的：室周器官(circumvent ricular organs，CVOs)作為腦的窗口(windows of the brain)缺乏血腦屏障，但是存在免疫屏障的加強(qiáng)。小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要的宿主巨噬細(xì)胞。它的存在對(duì)于室周器官存在免疫加強(qiáng)發(fā)揮著重要的作用。實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(experimental allergicencephalomyelitis)是人類多發(fā)性硬化的經(jīng)典動(dòng)物模型，其典型病理改變?yōu)槊撍枨?、血管周圍和腦

2、室周圍的炎細(xì)胞浸潤(rùn)以及血腦屏障的破壞。室周器官在EAE發(fā)病的過(guò)程中在形態(tài)學(xué)和細(xì)胞凋亡等方面變化都發(fā)生了顯著的改變。本研究旨在通過(guò)觀察穹窿下器和正中隆起小膠質(zhì)細(xì)胞的分布、形態(tài)以及其在EAE發(fā)病的不同時(shí)間點(diǎn)(正常、潛伏期、發(fā)病極期、回復(fù)后期)的形態(tài)學(xué)變化，以探討室周器官處小膠質(zhì)細(xì)胞在腦內(nèi)免疫狀態(tài)改變時(shí)的作用，進(jìn)一步揭示室周器官在EAE發(fā)病過(guò)程中的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法：清潔級(jí)Wistar雌性大鼠60只，3月齡，體重230g～250g，

3、由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物予以GPSCH+CFA免疫抗原足墊內(nèi)注射，制備EAE動(dòng)物模型。分別取正常對(duì)照組、潛伏期(免疫后10天組)、發(fā)病極期(免疫后發(fā)病4分組)，恢復(fù)期(發(fā)病后恢復(fù)為2分組)作為實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象。光鏡標(biāo)本制備：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用4％的多聚甲醛灌注固定，取含有穹窿下器和正中隆起的腦塊制備成石蠟切片，供蘇木素-伊紅染色及RCA-1組織化學(xué)染色用。電鏡標(biāo)本制備：以含4％多聚甲醛和2.5％戊二醛的混合固定液進(jìn)行灌注固定。取包

4、含穹窿下器和正中隆起的組織供透射電鏡標(biāo)本制備用。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：小膠質(zhì)細(xì)胞采用麥克奧迪數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(Motic Med6.0)記錄細(xì)胞數(shù)目、胞體直徑及突起長(zhǎng)短。數(shù)據(jù)用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。應(yīng)用SNK-q檢驗(yàn)，進(jìn)行兩兩比較，以P＜0.05為有顯著性差異。 結(jié)果：HE染色結(jié)果：SFO和ME在潛伏期均可見(jiàn)細(xì)胞數(shù)目較正常對(duì)照組增多，增多的細(xì)胞體積較小。在發(fā)病極期細(xì)胞增多更加顯著，形狀多樣。在恢復(fù)期又逐漸與正常對(duì)照組相似。RC

5、A-1組化染色結(jié)果：正常組對(duì)照組SFO和ME的小膠質(zhì)細(xì)胞都以阿米巴狀和分枝狀兩種狀態(tài)存在。在潛伏期和發(fā)病極期，靜息態(tài)小膠質(zhì)細(xì)胞大量被激活，數(shù)目增加，胞體增大，突起數(shù)目減少、長(zhǎng)度變短，并在發(fā)病極期達(dá)到峰值。隨著EAE癥狀的好轉(zhuǎn)恢復(fù)期小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目逐漸減少，胞體大小逐漸恢復(fù)正常，突起數(shù)目增多且長(zhǎng)度增加。透射電鏡結(jié)果：正常對(duì)照組可見(jiàn)SFO和ME的小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)僅能見(jiàn)到少量的溶酶體；胞核上的染色質(zhì)分布均勻，電子密度低。在潛伏期和發(fā)病極期溶酶體數(shù)目

6、增多、體積增大，并可見(jiàn)吞飲小泡；胞核上的染色質(zhì)邊集、濃縮，間距增寬，電子密度升高，在發(fā)病極期出現(xiàn)高峰?；謴?fù)期觀察到溶酶體數(shù)目較發(fā)病極期減少，體積縮小；胞核上的染色質(zhì)分布情況和電子密度接近正常對(duì)照組。 結(jié)論： 1、室周器官的小膠質(zhì)細(xì)胞在正常情況下存在兩種狀態(tài)：激活態(tài)和靜息態(tài)，與相鄰腦區(qū)的只存在靜息態(tài)小膠質(zhì)細(xì)胞的情況不同。說(shuō)明室周器官能夠即時(shí)對(duì)外界的刺激發(fā)生反應(yīng)，室周器官雖然缺乏血腦屏障，但它有免疫屏障的加強(qiáng)，從而使得整個(gè)腦