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1、目的:本研究應(yīng)用甲狀腺刺激抗體(TSAb)刺激體外培養(yǎng)的甲狀腺細胞,分析過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)在TSAb作用下人甲狀腺細胞中的表達情況,并初步探討PPARγ激動劑15-脫氧-△12,14-前列腺素J2(15d-PGJ2)對TSAb作用下人甲狀腺細胞存活和凋亡的影響。
方法:應(yīng)用原代培養(yǎng)人甲狀腺細胞為研究對象,TSAb作用細胞24h后,采用實時定量PCR法和Western-blot法分別檢測TSAb組(2
2、mg/mlTSAb陽性血清粗提IgG培養(yǎng))、TSAb陰性組(2mg/ml正常人血清粗提IgG培養(yǎng))及對照組(無血清的1640培養(yǎng)基培養(yǎng))甲狀腺細胞中PPARγ的表達情況;不同濃度15d-PGJ2(0、5、10、20、40μ mol·L-1)分別干預(yù)0、1224、48h后,應(yīng)用MTT法檢測甲狀腺細胞的存活率;干預(yù)24h后,利用Hoechst-PI染色熒光顯微鏡觀測細胞凋亡形態(tài)、Annexin-V-FITC/PI染色流式細胞技術(shù)測定細胞凋亡
3、率。同時應(yīng)用PPARγ拮抗劑GW9662阻斷PPARγ途徑,觀察15d-PGJ2對TSAb作用下甲狀腺細胞凋亡的變化。
結(jié)果:⑴PPARγmRNA及其蛋白在TSAb組、TSAb陰性組及對照組甲狀腺細胞中均有表達,而在TSAb作用下甲狀腺細胞中的表達顯著低于TSAb陰性組和對照組(P<0.05)。⑵15d-PGJ2呈濃度和時間依賴性抑制TSAb作用下甲狀腺細胞的存活,抑制高峰為20μ mol·L-115d-PGJ2作用24h
4、;5-40μ mol/L15d-PGJ2對TSAb作用下甲狀腺細胞有促進凋亡作用(p<0.05),并呈劑量依賴關(guān)系;10μmol/LPPARγ拮抗劑GW9662能拮抗20μmol/L15d-PGJ2對TSAb作用下甲狀腺細胞的凋亡作用(p<0.05)。
結(jié)論:①PPARγ在TSAb作用下甲狀腺細胞中的表達是顯著降低的,作為GD主要致病因子的TSAb,可能通過抑制PPARγ而使細胞增殖增多、凋亡受抑制。②PPARγ激動劑15
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