PPARγ拮抗劑發(fā)現(xiàn)及15d-PGJ-,2-在PPARγ-TGFβ-Smad2通路中的調(diào)控作用研究.pdf

1、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)是核受體家族中的一個非常重要的成員，它們在調(diào)節(jié)脂類和糖代謝平衡方面具有重要的功能?，F(xiàn)在PPARγ已經(jīng)作為一個重要的藥物篩選靶標(biāo)用于治療糖尿病、炎癥、壞脂血、高血壓和癌癥等。研究發(fā)現(xiàn)，相對于PPARγ的激動劑，PPARγ的拮抗劑和半激動劑在治療糖尿病的過程中，除了能有效的保持胰島素敏感性外，還表現(xiàn)出更小的副作用。因此，PPARγ拮抗劑具有更佳的成藥價值。本文通過運(yùn)用基于表面等離子共振(SPR)技術(shù)

2、的Biacore體外篩選系統(tǒng)，我們發(fā)現(xiàn)二肽H-Trp-Glu-OH(G3335)與PPARγ具有很高的選擇性結(jié)合活性，并且G3335可以抑制羅格列酮誘導(dǎo)增強(qiáng)的PPARγ/RXR相互作用。在此基礎(chǔ)上，運(yùn)用酵母雙雜交和哺乳動物反式激活實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步證實(shí)了G3335具有潛在的PPARγ拮抗活性。此外，同源模建和分子對接發(fā)現(xiàn)PPARγ的Cys285殘基在G3335/PPARγ相互作用中具有非常重要的貢獻(xiàn)，同時點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這一點(diǎn)。因此，通過發(fā)

3、現(xiàn)PPARγ拮抗劑G3335，我們建立了一套非常有效的PPARγ拮抗劑篩選平臺，而G3335則可能成為一個先導(dǎo)化合物用于治療糖尿病的研究。此章數(shù)據(jù)發(fā)表于ChemBioChem(2006)。
　　 15d-PGJ2是PPARγ的一個天然激動劑，它能夠促進(jìn)脂肪細(xì)胞生成，并且在調(diào)節(jié)炎癥發(fā)生過程中具有重要作用。除此之外，有研究報道15d-PGJ2還能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞因子Smad2的活性。然而到目前為止還沒有報道定量的分析這種效應(yīng)，并且在15d

4、-PGJ2調(diào)控Smad2的活性是否通過PPARγ的問題上，還存在很大的爭議。在此，我們運(yùn)用IN Cell Analyzer1000儀器和核轉(zhuǎn)運(yùn)分析模塊(NucleusTrafficking Analysis Module)軟件，定量的研究了15d-PGJ2調(diào)控TGFβ誘導(dǎo)的Smad2在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)位作用。結(jié)果表明：(1)、TGFβ能夠有效的誘導(dǎo)Smad2從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)(EC50=8.83 pM)；(2)、15d-PGJ2能夠通過P

5、PARγ有效的抑制TGFβ誘導(dǎo)的Smad2在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)位作用；(3)、在PPARγ/TGFβ/Smad2信號通路中，15d-PGJ2與PPARγ的另一個激動劑——羅格列酮對此通路具有完全相反的調(diào)控作用，這表明它們可能以不同的方式激活PPARγ。因此，本文除了定量的研究了15d-PGJ2和TGFβ在PPARγ/TGFβ/Smad2信號通路中的調(diào)控作用外，還為研究PPARγ的激動劑在復(fù)雜的藥理學(xué)通路中的調(diào)控作用提供了一個實(shí)驗(yàn)依據(jù)。此章結(jié)果發(fā)