口腔黏膜異種異體移植免疫反應(yīng)巨噬細胞浸潤及他克莫司干預(yù)作用的實驗研究.pdf

1、單核/巨噬細胞系統(tǒng)（Mononuclear phagocyte system，MPS）在非特異性免疫中，主要通過吞噬作用殺滅和清除病原體及異物并介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。巨噬細胞來自于骨髓的造血干細胞，經(jīng)血流到達各組織和臟器，發(fā)育成熟為Mφ，是體內(nèi)功能最活躍的細胞之一，在炎癥反應(yīng)、抗原提呈和免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮重要作用，其活躍的功能是由于表面存在多種抗原及多種受體。急性移植排斥反應(yīng)主要是以移植物內(nèi)單個核細胞浸潤為特征的細胞免疫應(yīng)答，大量研究表明外周血

2、單核細胞及組織中巨噬細胞通過加工遞呈抗原、分泌多種炎性介質(zhì)和免疫調(diào)節(jié)因子而與異種移植免疫排斥反應(yīng)密切相關(guān)，但口腔黏膜中巨噬細胞作為效應(yīng)細胞能否直接識別和排斥異種移植物及其在急性排斥反應(yīng)中的動態(tài)變化過程目前尚缺乏相關(guān)報道。因此本研究利用本課題組建立的大鼠口腔黏膜異種異體移植模型，研究大鼠頰黏膜巨噬細胞浸潤與外周血單核細胞在口腔黏膜異種異體移植免疫反應(yīng)中的動態(tài)變化過程及規(guī)律，有助于闡明口腔黏膜異種異體移植免疫病理反應(yīng)過程。 目的 ：

3、 研究大鼠口腔黏膜異種異體移植模型急性排斥反應(yīng)過程中頰黏膜CD68+巨噬細胞浸潤及外周血CD68+單核細胞百分數(shù)的動態(tài)變化過程和規(guī)律及其意義。 方法： 1、模型的建立：69只SPF級雌性wistar大鼠隨機分成移植組15只、移植+FK506組12只、創(chuàng)傷組12只、創(chuàng)傷+FK506組12只、正常組9只、正常+FK506組9只，以灌胃給藥方式給予各用藥組大鼠他克莫司（FK506），手術(shù)前三天2mg/kg/day，術(shù)后

4、0．5mg/kg/day。按照本課題組前期建立的大鼠口腔黏膜異種異體移植模型手術(shù)方法給予各組相應(yīng)處理，移植組和移植+FK506組：BALB/c小鼠舌體移植到雌性wistar大鼠口腔左側(cè)頰黏膜內(nèi)；創(chuàng)傷組和創(chuàng)傷+FK506組：大鼠口腔左側(cè)頰黏膜僅行創(chuàng)傷手術(shù)；正常組和正常+ FK506組：大鼠口腔左側(cè)頰黏膜不予任何處理。 2、于手術(shù)后第7天、第14天和第28天分別處死移植組5只、移植+FK506組4只、創(chuàng)傷組4只、創(chuàng)傷+ FK506組

5、4只、正常組3只和正常+FK506組3只大鼠，取其頰黏膜組織及外周血，免疫組織化學(xué)法（S—P法）檢測頰黏膜組織CD68+巨噬細胞的組織分布及動態(tài)變化情況，采用流式細胞儀動態(tài)觀察及定量分析外周血CD68+單核細胞百分數(shù)的變化情況。 結(jié)果： 1、免疫組化染色檢測結(jié)果顯示，術(shù)后第7天移植組、移植+FK506組、創(chuàng)傷組和創(chuàng)傷+FK506組大鼠頰黏膜CD68+巨噬細胞記數(shù)均達到3個時點中各自峰值，其中移植組為各組中最高值（580．

6、00個/HPF），其次為移植+FK506組（325．80個/HPF），再次為創(chuàng)傷組（233．75個/HPF），每兩組之間比較結(jié)果顯示移植組與創(chuàng)傷組、移植組與正常組、移植+ FK506組與正常+FK506組在術(shù)后第7天頰黏膜CD68+巨噬細胞記數(shù)差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．05）。術(shù)后第14天大鼠頰黏膜CD68+巨噬細胞記數(shù)移植+FK506組為最高值（246．45個/HPF），其次為移植組（220．00個/HPF），再次為創(chuàng)傷+FK506組

7、（141．10個/HPF），每兩組之間比較結(jié)果顯示移植組與創(chuàng)傷組、移植組與正常組、移植+FK506組與正常+FK506組在術(shù)后第14天頰黏膜CD68+巨噬細胞記數(shù)差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．05）。術(shù)后第28天大鼠頰黏膜CD68+巨噬細胞記數(shù)移植組為最高值（173．00個/HPF），其次是創(chuàng)傷組（106．60個/HPF），再次為創(chuàng)傷+FK506組（92．00個/HPF），每兩組之間比較結(jié)果顯示移植組與正常組、創(chuàng)傷組與正常組在術(shù)后第28天頰

8、黏膜CD68+巨噬細胞記數(shù)差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．05）。除創(chuàng)傷組的最低值出現(xiàn)在術(shù)后第14天之外，移植組、移植+ FK506組和創(chuàng)傷+FK506組大鼠頰黏膜CD68+巨噬細胞記數(shù)均隨時間推移呈遞減趨勢。相同時間點不同處理組大鼠在術(shù)后第7天、第14天和第28天移植區(qū)巨噬細胞記數(shù)差別均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．05）。相同處理不同時間點各組內(nèi)移植組、創(chuàng)傷組大鼠在3個不同時間點移植區(qū)巨噬細胞記數(shù)差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．05）。 2、流

9、式細胞儀檢測結(jié)果顯示，術(shù)后第7天正常組外周血CD68+單核細胞百分數(shù)為最高值（47．54％），其次是移植+FK506組（42．63％），再次為正常+FK506組（41．66％）。術(shù)后第14天正常組為最高值（38．92％），其次是創(chuàng)傷+ FK506組（26．96％），再次為創(chuàng)傷組（26．48％）。術(shù)后第28天移植+FK506組為最高值（67．33％），其次是創(chuàng)傷組（64．2％），再次為正常+ FK506組（56．27％），每兩組之間比較顯

10、示移植與移植+ FK506組、移植組與創(chuàng)傷組、移植+FK506組與創(chuàng)傷+FK506組、移植+FK506組與正常+FK506組在術(shù)后第28天其外周血CD68+單核細胞百分數(shù)差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．05）。除外正常組和正常+FK506組，其余各組外周血CD68+單核細胞百分數(shù)最高值均出現(xiàn)在術(shù)后第28天，最低值均出現(xiàn)在術(shù)后第14天。相同時間點不同處理組大鼠外周血CD68+單核細胞百分數(shù)在術(shù)后第7天和第14天其外周血CD68+單核細胞百分數(shù)差

11、別無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0．05），而在第28天差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．05）。相同處理不同時間點各組內(nèi)移植組、創(chuàng)傷組大鼠在3個不同時間點其外周血CD68+單核細胞百分數(shù)差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．05）。 3、術(shù)后第7天移植組大鼠外周血CD68+單核細胞百分數(shù)與其頰黏膜局部浸潤的巨噬細胞記數(shù)成負相關(guān)關(guān)系（P<0．05），其余各時間點之間各處理組大鼠外周血CD68+單核細胞百分數(shù)與頰黏膜局部浸潤的巨噬細胞記數(shù)均無相關(guān)關(guān)系（P>0．0