環(huán)孢素A、他克莫司對上皮細胞灌注后大鼠氣管異位移植再上皮化的影響.pdf

1、目的:
　　 探討細胞灌注技術(shù)在細胞種植中的應用及免疫抑制劑對同種異體大鼠氣管異位移植再上皮化的影響。
　　 方法:
　　 SD大鼠氣管上皮細胞原代培養(yǎng)，制作細胞懸液(10×106/ml)。Wistar大鼠作為供體，SD大鼠作為受體。免疫抑制劑組：將Wistar大鼠氣管上皮細胞消化后制作成裸氣管，灌入SD大鼠氣管上皮細胞懸液，移植于SD大鼠背部皮下，每日給予環(huán)孢素A(CsA)及他克莫司(FK506)處理；非免疫抑

2、制劑組：未予以免疫抑制劑處理，余步驟同免疫抑制劑組；空白對照組：將Wistar大鼠氣管灌入生理鹽水，移植于SD大鼠背部皮下。分別于移植后5天、10天、20天及30天獲取標本，免疫組織化學染色CK14、CK18和CFTR鑒定氣道上皮細胞分化，Ki-67鑒定上皮細胞增殖情況；移植后30天的標本行HE染色評價氣道上皮的完整性、分化程度、粘膜下炎癥細胞浸潤和纖維組織增生情況，透射電鏡觀察細胞的超微結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果:
　　 術(shù)后

3、30天標本HE染色結(jié)果顯示：免疫抑制劑組粘膜上皮完整，氣管管腔可見分化良好的纖毛上皮，粘膜下輕度纖維組織增生和炎細胞浸潤；非免疫抑制劑組粘膜上皮基本完整，主要為扁平上皮，粘膜下纖維組織增生、炎細胞浸潤明顯；空白對照組粘膜上皮不明顯，纖維組織明顯增生，大量炎性細胞浸潤，氣管官腔堵塞(p=0.023)。免疫組化結(jié)果顯示：免疫抑制劑組術(shù)后晚期氣管上皮細胞CK14、CK18和CFTR表達陽性，術(shù)后早期Ki-67表達陽性，晚期表達活性降低；非免疫

4、抑制劑組上皮表達以上抗原較弱，熒光免疫未見顯示；對照組管腔閉塞，無陽性顯示。透射電鏡顯示免疫抑制劑組可見纖毛上皮結(jié)構(gòu)完整，細胞器形態(tài)正常，細胞間連接緊密：非免疫抑制劑組則見較稀疏的扁平上皮細胞，并可見大量的空泡和凋亡的細胞。
　　 結(jié)論:
　　 1、體外培養(yǎng)的上皮細胞可以通過灌注技術(shù)達到細胞種植的目的，在異系受體鼠體內(nèi)形成具有較為完整的屏障功能的上皮結(jié)構(gòu)。
　　 2、免疫抑制劑減少炎癥反應，有效促進細胞貼壁、增殖