燈盞花注射液抗新生鼠缺氧缺血性腦損傷的作用及對(duì)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：自90年代以來(lái)，對(duì)于新生兒缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）的有效治療方法一直是國(guó)內(nèi)新生兒學(xué)科的研究熱點(diǎn)，但并未取得突破性進(jìn)展。近年來(lái)，中藥對(duì)缺血缺氧性腦損傷的治療作用越來(lái)越多的引起人們的關(guān)注。中藥的活性成分能多靶點(diǎn)地作用于腦缺血缺氧后的損傷環(huán)節(jié)。燈盞花注射液（Breviscapin Injection，BI）具有抗氧化，清除自由基，擴(kuò)張微血管的作用。目前，臨床主要用于治療腦梗

2、塞引起的腦缺血，而應(yīng)用燈盞花注射液治療新生兒HIBD的相關(guān)研究在國(guó)內(nèi)還未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以新生7日齡大鼠缺氧缺血性腦損傷模型為研究對(duì)象，通過測(cè)定HIBD后不同時(shí)間點(diǎn)病變側(cè)海馬Bcl-2（B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2，BCenlymphoma/leukemia-2）、Bax（Bcl-2 associated，X protein）蛋白的表達(dá)，觀察新生鼠HIBD后Bcl-2、Bax的變化及燈盞花注射液對(duì)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)變化的影響和神經(jīng)元保

3、護(hù)作用，從而為臨床新生兒HIBD的治療打下良好的理論基礎(chǔ)。
　　 方法：選用72只新生7日齡SD大鼠，隨機(jī)分為以下三組：
　　 sham組（n=24）：行頸部手術(shù)，只暴露左側(cè)頸總動(dòng)脈，不結(jié)扎。也不進(jìn)行缺氧處理。
　　 HLBD組（n=24）：分離并結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈，術(shù)后恢復(fù)2h，進(jìn)入8％O2與92％N2混合氣體環(huán)境中缺氧2 h。之后放回母鼠身邊喂養(yǎng)，不作其他處理。
　　 BI+HIBD組（n=24）：HI

4、BD后，按體重腹腔注射燈盞花注射液，每日一次。分別于24 h、3 d、7 d、14 d取材，用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)Bcl-2、Bax的表達(dá)變化情況，同時(shí)進(jìn)行腦組織硫堇染色光鏡觀察各組各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)元存活情況。
　　 結(jié)果：
　　 1 Bcl-2蛋白表達(dá)變化：sham組各時(shí)間點(diǎn)大鼠海馬CA1區(qū)未見明顯陽(yáng)性細(xì)胞。與sham組相比，HIBD組自24 h開始，Bcl-2表達(dá)逐漸增加（P<0.05），表現(xiàn)為海馬CA1區(qū)Bcl-2

5、免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯增多，染色明顯加深，3 d時(shí)達(dá)到高峰（與其余各時(shí)間點(diǎn)比較差別有顯著意義P<0.05），其后表達(dá)逐漸降低，但7 d時(shí)與sham組相比有差別（P<0.05），14 d時(shí)與sham組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BI+HIBD組各時(shí)間點(diǎn)Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)一步增加，于3 d時(shí)增加最為明顯（P<0.05），7 d、14 d時(shí)Bcl-2表達(dá)逐漸減少，7 d組與HIBD組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，差別仍有顯著意義（P<0.05）。
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6、Bax蛋白表達(dá)變化：Bax蛋白在sham組各時(shí)間點(diǎn)大鼠海馬CA1區(qū)未見明顯陽(yáng)性顆粒，與sham組相比，HIBD組在缺氧缺血完成后24 h，Bax表達(dá)開始逐漸增加，并于3 d時(shí)達(dá)高峰（與其余各時(shí)間點(diǎn)相比差別有顯著性意義，P<0.05），海馬CA1區(qū)可見Bax免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯增多，染色加深。7 d、14 d時(shí)表達(dá)逐漸下降，但與sham組各時(shí)間點(diǎn)比較仍具有顯著差異（P<0.05）。BI+HIBD組與HIBD組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比，治療組Bax陽(yáng)

7、性表達(dá)均減少，3 d時(shí)減少最多（P<0.05）。7 d、14 d時(shí)Bax逐漸增加，但與HIBD組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較差別仍有意義（P<0.05）。
　　 3硫堇染色結(jié)果顯示：sham組大鼠海馬CA1區(qū)無(wú)錐體細(xì)胞缺失。HIBD后24 h，CA1區(qū)神經(jīng)元出現(xiàn)細(xì)胞排列上的紊亂及形態(tài)的不規(guī)則，7 d時(shí)CA1區(qū)神經(jīng)元開始出現(xiàn)大量變性、壞死、丟失，海馬CA1區(qū)遲發(fā)性神經(jīng)元死亡（DND）明顯，組織學(xué)分級(jí)（HG）顯著升高，神經(jīng)元密度（ND）顯著下降（

8、P<0.05）。HIBD后14 d時(shí)僅見數(shù)個(gè)神經(jīng)元存活。BI+HIBD組海馬CA1區(qū)DND不明顯，與HIBD組相比，HG顯著降低，ND顯著升高（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 大鼠給予HIBD處理后Bcl-2蛋白、Bax蛋白表達(dá)均增加，海馬CA1區(qū)神經(jīng)元出現(xiàn)大量壞死丟失，HG顯著升高。燈盞花治療后，Bcl-2蛋白表達(dá)進(jìn)一步增加，Bax蛋白表達(dá)減少，海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的變性壞死明顯減輕。提示燈盞花注射液可能通過抑制B